高效液相色谱检测左旋肉碱的介绍
方法提要：试样中的左旋肉碱经稀盐酸提取，皂化后使结合态的左旋肉碱游离出来。阳离子交换固相萃取柱净化，在氯甲酸丁酯、三乙胺的催化下与L-丙酰胺-β-萘胺发生取代反应，生成紫外吸收较强的化合物，供配有二极管阵列检测器或紫外检测器的高效液相色谱仪测定，外标法定量。
样品处理
提取：乳粉、液体饮料类（左旋肉碱含量小于等于1000 mg/kg样品）：称取5 g（精确到0.01 g）于50 mL容量瓶中，加入20 mL 0.1 mol/L盐酸溶液，涡旋振荡1 min，超声5 min溶解样品，加入5 mL 1mol/L氢氧化钾溶液涡旋混合，60℃水浴皂化30 min，冷却至室温，加入5 mL 1 mol/L盐酸溶液，涡旋混匀1 min，以0.1 mol/L盐酸溶液定容至50 mL.取1 mL提取液于15 mL试管中，加入9 mL乙腈，涡旋混匀1 min后取部分于5 mL离心管中，16000 r/min离心5 min，所得上清液待净化。左旋肉碱含量大于1000 mg/kg的样品先稀释后再提取。固体饮料类用水溶解并稀释至合适含量后提取。
净化：取1 mL待净化溶液于活化好的阳离子固相萃取柱中，以1滴/秒的速度过柱，用3 mL 10 mmol/L的盐酸水溶液淋洗，弃去淋洗液，真空抽干1 min，用2 mL 4%氨水甲醇溶液洗脱，收集洗脱液于15 mL离心管中，40℃下氮气吹干，所得残渣待衍生。
衍生：在残渣中加入0.5 mL衍生试剂（0.45 g/100 mL L-丙酰胺-β-萘胺的乙腈溶液），超声1 min溶解残渣并混匀，再依次加入0.5 mL催化剂Ⅰ（0.50 g/100 mL三乙胺的三氯甲烷溶液）和0.5 mL催化剂Ⅱ（0.50 g/100 mL氯甲酸丁酯的三氯甲烷溶液），漩涡混匀3 min，室温下静置反应30 min后，加入1 mL 50 mmol/L碳酸氢钠水溶液，漩涡混匀3 min终止反应。4000 r/min离心5 min，取上层水相过0.22 μm滤膜，供液相色谱测定，测定需在12 h内完成。
测定步骤：分别吸取25 μL、50 μL、100 μL、500 μL、1000 μL左旋肉碱标准工作液（10.0 μg/mL）于离心管中进行衍生。所得左旋肉碱衍生产物标准系列浓度为0.25 μg/mL、0.50 μg/mL、1 μg/mL、5 μg/mL、10 μg/mL，在上述色谱条件下测定标准工作溶液和样液，外标法定量。左旋肉碱衍生产物参考保留时间为3.8 min。空白试验除不加试样外，均按上述操作步骤进行。
