RNA 样品可以在-80°C 中保存 6 个月。总细胞 RNA 采用 StratageneRNA 提取试剂盒，按照说明书进行。另外，也可选用 PicoPureRNA 提取试剂盒，尤其是细胞较少时。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。
| 实验材料 | LCM 帽子 |
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| 试剂、试剂盒 | 乙醇糖原RNA 提取试剂盒超纯水 |
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| 仪器、耗材 | 移液器 |
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| 实验步骤 | 一、材料
1. 缓冲液、试剂和溶液
75% 乙醇 (超纯水配制）
糖原，5 mg/ml(Ambion，Austin，TX)
StratageneRNA 提取试剂盒（200345，StratageneCloningSystems，LaJolla,CA)，
包括变性溶液、饱和酚 (存于 4°C)、β-巯基乙醇 (存于 4°C)、氯仿：异戊醇、
2mol/L 乙酸钠、异丙醇。或者使用 PicoPureRNA 分离试剂盒（KIT0202，Arcturus，
MountainView,CA)
DEPC 处理的超纯水 (BiotecxLaboratories，Houston，TX)(4°C 储存）
2. 特殊设备
移液器
无 RNA 酶的 1.5 ml 管子
3. 细胞和组织
来自方案 3 的 LCM 帽子
二、方法
1. 加入 200ul 变性溶液和 1.6ulβ-巯基乙醇到 0.5 ml 管子中。
2. 将 LCM 帽子插入管子，涡旋 5s。
3. 倒置管子孵育 5 min。
4. 移去 LCM 帽子。这一步获得的样品可以在-80°C 保存 6 个月。
5. 将溶液转移到 1.5 ml 管子中。
6. 加入 2ul2mol/L 的乙酸钠，温和混匀。
7. 加入 220ul 水饱和的酚（底层），温和混匀。
8. 加入 60ul 氯仿：异戊醇，剧烈晃动。
9. 放于冰上 15 min。
10.14000r/min4°C 离心 30 min。
11. 吸上层溶液到新管子中。
12. 加入 2ul 糖原（最终浓度 10~150ug/ml)。
13. 加入 200ul 冷异丙醇。
14.-80°C 过夜。 |
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