黑豆蚜胞内共生菌对日本柄瘤蚜茧蜂发育和繁殖的影响
实验概要
黑豆蚜是豆科作物的常见害虫。日本柄瘤蚜茧蜂是黑豆蚜的优势内寄生蜂。本实验脱除黑豆蚜胞内共生细菌后，观察了对日本柄瘤蚜茧蜂生长发育和繁殖的影响。
实验材料
黑豆蚜用蚕豆苗饲养，日本柄瘤蚜茧蜂的日常饲养是在蚜虫2-3龄时接蜂，接蜂时间24小时。温度23-25℃，光周期16:8。
实验步骤
1. 蚜虫共生菌的脱除
日常饲养的黑豆蚜是有共生细菌的蚜虫，称之为“共生蚜虫”，其胞内共生细菌的脱除采用饲喂抗生素利福平的方法。经利福平处理后，脱去共生细菌的蚜虫称为“脱共生蚜虫”。
2. 蚜茧蜂在共生和脱共生蚜虫体内生长发育和繁殖的观察
共生和脱共生黑豆蚜，在发育到2龄时分别接入日本柄瘤蚜茧蜂，接蜂时间为6h。将寄生蜂移去48h后，每隔24h随机取出30头被寄生的蚜虫进行解剖，并测量蚜茧蜂幼虫的体长，以检测寄生蜂在共生和脱共生寄主蚜虫体内的生长和发育情况。待僵蚜形成后，把僵蚜从叶子上剥下后分别存放于玻璃瓶中，每隔12h进行抽样解剖，观察蚜茧蜂的发育。当寄生蜂羽化时，称量羽化时成蜂的体重，并统计成蜂羽化率。
将刚羽化的蚜茧蜂放入备有足量2龄若蚜的产卵笼内，同时供以30%的蜂蜜水，每隔24小时换一次蚜虫，直到蚜茧蜂死亡，记录死亡时间，计算蚜茧蜂的寿命。每次换笼48小时后解剖处理蚜虫，以寄生蜂的初孵幼虫数计算成蜂的产卵量。
3. 共生和脱共生蚜虫被寄生后总蛋白和游离氨基酸的测定
蚜茧蜂产卵96h后，被寄生的蚜虫已有显著的外部特征，这时，挑取被寄生的蚜虫，称重后提取总蛋白，提取使用Wilkinson (2001)的方法。蚜虫组织中总蛋白含量的测定按Bradford (1976)的方法进行。
蚜虫组织中游离氨基酸的提取见Douglas (1996)的方法；游离氨基酸测定用日立835-50型氨基酸自动分析仪。
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