共生菌对黑豆蚜体内总蛋白和游离氨基酸代谢的影响
实验概要
生理学和遗传学研究表明，共生菌能为其寄主提供食物中缺乏的氨基酸。本研究的目的是弄清黑豆蚜在脱去共生菌后的生长发育及其体内蛋白质和游离氨基酸水平的变化。
实验材料
黑豆蚜用盆栽蚕豆(Vicia faba L.)苗饲养，温度23-25℃，光周期16:8。
实验步骤
1. 脱共生蚜虫的培养
将3周大的蚕豆苗根部冲洗干净后浸在200ug/ml的利福平溶液中，24小时后，接上成蚜使之产子，10小时后移去成蚜有，再过48小时后移入正常植株饲养。经过这种处理所获得的蚜虫即是脱共生蚜虫。未经抗生素处理的正常蚜虫称为共生蚜虫。
2. 脱共生蚜虫发育和生殖观察
在每株豆苗上接5头利福平处理过的黑豆蚜，用正常蚜虫作对照。观察并记录蚜虫的发育情况和生殖数量。在蚜虫发育为成蚜的当天在显微镜下测量蚜虫的体长和体宽。
3. 总蛋白和游离氨基酸含量测定
1) 蚜虫体内的总蛋白含量测定用Bradford (1976)的方法，用牛血清蛋白作对照。按照Wilkinson(1996)的方法提取总蛋白。取10-30头7日龄的蚜虫，称重后加0.4ml冰冷的50mM Tris-HCl pH7.5进行匀浆，13000rpm离心l0min，上清液用于总蛋白含量的测定。
2) 游离氨基酸的提取方法是：将蚜虫称重后，在80%的冷甲醇中匀浆，13000rpm离心l0min，上清液用于测试。本试验用Hitachi 835-50型氨基酸自动分析进行测试，总共可分析出17种氨基酸。
4. 统计分析
所测定的数据用学生氏t-测验进行分析，用Microsoft Excel 2002软件(Microsoft)进行计算。
推荐
