农药残留检测相关知识
一、农药分类
农药是用于防治危害农作物及农副产品的病虫害、杂草及其他有害生物的化学药剂的统称。其分类方法有多种，常见的几种分类如下：
1、根据防治对象的不同，分为杀虫剂、 螨剂、杀菌剂、除草剂、杀鼠剂等。常将防治害虫的称为杀虫剂，防治红蜘蛛的称为杀螨剂，防治作物真菌、细菌及病毒的称为杀菌剂，防治杂草的称为除草剂，防治鼠类的称为杀鼠剂。
2、根据农药的作用方式分为胃毒剂、触杀剂、熏蒸剂、内吸剂、引诱剂、驱避剂、拒食
剂、不育剂等。
3、根据农药的化学组成和结构可分为有机农药和无机农药两大类。农药中除少部分的无机物外，大部分都为有机化合物，其中有元素有机化合物、金属有机化合物及一般有机化合物之分。我们所测试的有机磷属于元素有机化合物之类。
另外还有根据农药的来源、农药的使用方法、防治原理等来分类。
二、生化分析适用于什么农药
绝大多数化学农药之所以能杀虫、螨、或者有效的主要原因就在于它们对生物内的酶有不同程度的抑制作用。因此，利用生化分析测试的农药应该是生物体内某种酶的抑制剂(激活
剂)， 使得这些酶失去正常的生理作用，从而使生物表现出中毒的症状。当然，基于目前的研究水平，有些农药虽然知道它对某种酶有不利的影响，但是该酶的提取，保存等因素的原因也制约着用生化方法来测试该种农药。所以虽然生物体内酶的种类很多，化学农药作用原理也大多基于对生物体内酶的作用，但利用生化分析进行测试 的农药种类并不多。
三、测试农药残留有哪些方法
农药残留的测试方法，总的来说可以分为常规测试方法和速测方法。常规的测试方法有气相色谱、凝胶色谱及薄层色 谱法。这些方法都是利用农药在不同载体中的分配系数不同而得到分离，从而定性和定量来测试农药的种类及含量。速测方法主要有速测卡法和酶抑制率法(又称分 光光度法)两种。无论是速测卡法还是酶抑制率法，其都是利用酶活性被抑制原理。
四、乙酰胆碱酯酶对乙酰胆碱的作用原理
乙酰胆碱酯酶和乙酰胆碱作用时，首先形成一个酶底物的络合物，接着乙酰胆碱上的酰基转移到酶分子上,形成乙酰化酯酶。乙酰化酯酶很不稳定，极易水解，其半衰期约为0.1毫秒。乙酰化酯酶水解后又释放出酶分子，从而使酶复活，再循环利用。
五、有机磷及氨基甲酸酯类农药对乙酰胆碱酯酶的抑制过程，什么是可逆抑制
有机磷及氨基甲酸酯类农药是乙酰胆碱酯酶的底物胆碱酯的结构类似物。它们同乙酰胆碱酯酶作用时，首先形成非共价的中间复合物，然后被水解，水解的同时，磷酰基与胆碱酯酶活性中心丝氨酸羟基作用生成以共价结合的磷酰化 酶。磷酰化酶中的磷酰化基很难水解，所以磷酰化酶很稳定，其稳定性是乙酰化酶的107倍以上。因此，可以说有机磷对乙酰胆碱酯酶的抑制是不可逆的。不可逆 抑制是指抑制剂与酶分子上的某些基团以牢固的共价键结合使酶失活，它的特点是随时间的延长会逐渐的增加抑制，最后达到完全抑制。而可逆抑制是指抑制剂与酶分子结合是可逆的，不会产生不可逆的共价修饰等作用。
六、米氏常数的含义
米氏常数km表示酶与底物的复合物的离解常数，每一种酶对于特定的底物，都有自己特定的km。1/km称为酶与底物结合的亲和常数。米氏常数也可以定量为在一定的酶浓度下，酶触反应速度为最大反应速度一半时底物的浓度。
七、预反应过程中，影响农药对乙酰胆碱酯酶的抑制率的因素
农药对乙酰胆碱酯酶的抑制率的大小主要取决于农药的分子结构。当农药分子中含有起 作用的强吸电子基团时，磷酰基与乙酰胆碱酯酶的丝氨酸羟基就愈容易结合，在一定时间内，抑制率就愈大。当然，对于一定的农药，在预反应中，抑制环境温度和抑制时间及农药浓度等都是影响抑制率大小的因素。所以在预反应中，应尽可能地保证环境温度、抑制时间以及农药浓度的一致。有些农药刚配制好时测试的抑制率 较大，几天后同样农药同样条件再测试时可能抑制率又降低，这就是因为部分农药已经降解，起不到抑制作用所致。
八、预反应结束后，影响抑制率测定的因素
酶抑制率法测试农药残留的过程中，预反应完成后，再加入底物进行显色反应。测试根据体系中颜色变化的情况来决定抑制率的大小。所以在测试一批待测样时，加入底物和上机测试的过程应尽量快，且加入底物的量一定要一致，也不得有任何溶液的损失，否则测出的数据时不可靠的。
九、试样提取中应该注意些什么?
有些果蔬如葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇、番茄等中含有对酶有影响的植物次生质，有些蔬菜中叶 绿素的含量太高，影响比色反应。所以对于以上种类的果蔬，应尽可能的采取整株(体)浸提的办法来消除干扰。另外，由于同一株(个)待测样品，其不同部位的 农药含量不同，因此，进行重复性测试时，最好为同一个待测液的不同次数测定，否则可能会出现因取样不同出现重现性不好的情况。
十、药剂应怎样保存?
酶抑制率测试法所用的试剂大多为生化试剂，因此它们的保存条件较为苛刻。对于粉剂化的酶及底物应保存在-20℃环境中。 对于已经配制成溶液的药剂如酶液、底物溶液、显色剂溶液等应置于0-4℃环境中保存。而浸提剂无论配制成溶液与否，在常下密封保存即可。 十一、国家对农药残留速测有哪些指标，其测试方法有哪几类?
目前国家对农药残留速测出台的标准有《中华人民共和国国家标准》和《中华人民共和国农业行业标准》两个标准。这两个标准规定了测试结果的判断标准及以及常见农药如甲胺磷、氧化乐果、克百威、敌敌畏等农药的最低检出限。不同的标准，根据所用 酶的种类及方法，规定的各种农药的检出限量和判断标准也不同。例如，农业行业标准判断依据为抑制率大于70%时不合格，而国标有规定抑制率大于50%为不 合格，也有规定吸光度值大于0.9为不合格。两种标准所使用的方法都是利用酶被农药抑制，活性降低原理。其中国家标准中，有使用乙酰胆碱酯酶，也有使用植物酯酶—面粉酶，而行业标准则使用的是丁酰胆碱酯酶。
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