嗅鞘细胞的细胞分离方法相关介绍
嗅鞘细胞分离有传统分离法：嗅球置于少量ACSF（人工脑脊液）中(4℃冰浴)，在解剖显微镜下，将位于嗅球最外层的嗅神经层、嗅神经及包被的脑膜轻轻剥下，用ACSF洗2次，组织块用0.125%胰酶(Sigma)37℃消化20min，经胰酶消化的组织块再移至完全培养液(DMEM：胎牛血清=9：1美国GIBCO公司)中，用滴管轻轻吹打组织块使之形成细胞悬液备用。分层消化法：整个嗅球置于0.125%胰酶中，37℃消化15min（不时摇动），取出含有细胞的酶液，终止酶反应。剩余的嗅球再用酶消化，重复以上操作6次，细胞悬液分别收集于6支小试管内备用。直接挤压法：嗅球置于少量ACSF中，用眼科镊子直接将嗅球撕烂、挤压，将剩余的片状组织块转移至另一试管内，用ACSF洗2次，组织块用0.125%胰酶（Sigma）37℃消化20min，经胰酶消化的组织块再移至完全培养液中，用滴管轻轻吹打组织块使之形成细胞悬液。
传统分离方法一般分为两大类，一类是酶消化法，另一类是利用OECs对p75NGFR有特异免疫性的特点，采用免疫抗体包被培养瓶方法、磁珠悬浮法和流式细胞仪分离法将OECs分离。产量上，直接挤压法最高，传统分离法次之，分层消化法最低。传统方法（包括免疫抗体包被培养瓶方法、磁珠悬浮法和流式细胞仪分离法）分离过程复杂，操作时间长，需要特殊仪器及器械，特别是含OECs丰富的嗅神经层非常薄，即使在解剖显微镜下也无法与其它组织区别，嗅神经更是难于找到，分离效果很差。直接挤压法特点是操作简单易行，省时，不需要特殊仪器设备，且在获得细胞的数量上略多于传统分离法。直接挤压法优于传统方法和分层消化法。为了加快OECs的增殖速度，提高产量可以在培养液中加入一些促进细胞分裂的物质，如在培养液中加入适量的牛垂体提取物（BPE）可使OECs增殖明显加快，但因其它细胞增殖也加快，使其纯度有所下降。应用Arac纯化OECs方法简便、经济，OECs纯度可达70%左右。时一步纯化还可用Thy-1.1抗体杀死成纤维细胞，文献[13]报道纯度可达99%以上，其缺点是方法复杂、费用昂贵。
