绝对计数的原理及意义
原理
干细胞计数是根据血液中不同血细胞的特性，选择特异性标记物，采用多参数分析的方法，排除细胞之间的干扰，识别出不同的细胞并分类计数。具体而言，针对干细胞核酸含量高、大小与大淋巴细胞相近、粒度与淋巴细胞相似、CD45 表达弱、CD34 表达强的特点，首先可通过核酸染料标记所有的有核细胞(包括白细胞和幼稚的红细胞)，排除细胞碎片及无核细胞；其次通过抗CD45抗体标记所有白细胞，并根据CD45表达强度的不同区分不同的白细胞，从而排除CD45表达强的细胞，避免CD45弱表达细胞的丢失；然后用抗CD34抗体标记CD34阳性表达的细胞，即干细胞。总之，通过核酸量、SSC的强度、CD45和CD34的表达量等多个参数将干细胞与淋巴细胞、单核细胞、粒细胞、死细胞、细胞碎片、血小板团块以及红细胞区别开来。
同时，样品管中还加有已知数量的三色标记的易于与细胞区分的荧光微球作为绝对计数的内标。根据所采集到的干细胞数与荧光微球数目的比值，再乘以样品管中的荧光微球数，即为样品管中干细胞的数目，再除以样品的体积，即可求得样品中干细胞的浓度。
意义
对于有剂量要求的干细胞移植方案而言，精确的干细胞计数显然十分重要。研究表明，需要输入病人体内的 CD34阳性细胞量取决于病人的体重，每公斤体重应输入2百万至5百万个CD34阳性细胞。此重要性也显示在动员及白细胞分离过程中，如通过计数细胞水平判断动员是否成功、何时为最佳采集时间以及采集到的干细胞数量是否足够等等。由于干细胞所占的比例很小，在外周血中不到0.1%，在骨髓中也只占单个核细胞的1%至4%，因此利用流式细胞仪在大量细胞中快速准确地筛选并测出干细胞的绝对数量对于干细胞移植具有重要意义
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