解析多肽分离实验
CE 分离来自复合体混合物如蛋白酶解产物的特定多肽尤其有用。以下的方案阐述使用低压样品注射的 P/ACE 5000 CE 仪器(Beckman) 的用法。但其他仪器也可以依据制造商的操作指南进行同样的分离。
实验材料 | |
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试剂、试剂盒 | 0.05 mol/L 和 0.25 mol/L 磷酸钠缓冲液(pH 2.30 存储于 4℃)0.1 mol/L 氢氧化钠 |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 1. 用以下溶液冲洗进行预处理毛细管: 10 倍柱体积的 0.1 mol/L NaOH,在低压(0.5 lb/in2)下 10 倍柱体积的水 4 倍柱体积的 0.25 mol/L 磷酸钠缓冲液,pH 2.30。 存储柱于 0.25 mol/L 磷酸钠缓冲液,pH 2.30,25℃。 2. 将 10 nmol (约 300 g) 溶于 10 ml 的 0.05 mol/L 磷酸钠缓冲液,pH 2.30,制备多肽混合物。以每管 100 μl 冻存未用的混合物。 3. 在 0.5 lb/in2,10 s 内用低压注射上样 10~20 nl 样品。 4. 使用以下条件分离多肽混合物: 电解质:0.05 mol/L 磷酸钠缓冲液,pH 2.3 探测波长:200 nm 温度:25℃ 电压:25 kV 5. 用以下溶液清洗柱子: 0.5 min,水 1.0 min,0.1 mol/L NaOH 1.5 min,水 1.0 min,0.25 mol/L 磷酸钠缓冲液,pH 2.30 室温存储柱子于运行缓冲液或水中。 |
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