鞭毛染色实验——硝酸银染色法
细菌的鞭毛很纤细，其直径通常为 0.01 ~0.02 μm， 所以，除了很少数能形成鞭毛束（由多根鞭毛构成）的细圈可以用相差显微镜直接观察到鞭毛束的存在外，一般细菌的鞭毛均不能用光学显微镜直接观察到，而只能用电子显微镜观察。要用普通光学显微镜观察细菌的鞭毛，必须用鞭毛染色法。
鞭毛染色方法很多，本实验介绍硝酸银染色法和改良的 Leifson 氏染色法，前一种方法更容易掌握，但染色剂配制后保存期较短。
| 实验方法原理 | 鞭毛染色的基本原理，是在染色前先用媒染剂处理含使它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色。 |
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| 实验材料 | |
| 试剂、试剂盒 | |
| 仪器、耗材 | |
| 实验步骤 | 1. 菌种的准备 要求用活跃生长期菌种作鞭毛染色和运动性的观察。对于冰箱保存的菌种通常要连续移种 1～2 次，然后可选用下列方法接种培养作染色用菌种： 1.1 取新配制的营养琼脂斜面（表面较湿润。基部有冷凝水）接种， 28～32℃ 培养 10～14 h， 取斜面和冷凝水交接处培养物作染色观察材料； 1.2 取新制备的营养琼脂（含 0.8～1.0％ 的琼脂）平板，用接种环将新鲜菌种点种于平板中央， 28～32℃ 培养 18～30 h， 让菌种扩散生长，取菌落边缘的菌苔（不要取菌落中央的菌苔）染色观察的菌种材料。 2. 载玻片的准备 将载玻片在含适量洗衣粉的水中煮沸约 20 min， 取出用清水充分洗净，沥干水后置 95％ 乙醇中，用时取出在火焰上烧去酒精及可能残留的油迹。 3. 菌液的制备 取斜面或平板菌种培养物数环于盛有 1～2 ml 无菌水的试管中，制成轻度混浊的菌悬液用于制片，也可用培养物直接制片，但效果往往不如先制备菌液。 4. 制片 取一滴菌液于载玻片的一端。然后将玻片倾斜，使菌液缓缓流向另一端，用吸水纸吸去玻片下端多余菌液，室温（或 37℃ 温室）自然干燥。 干后应尽快染色，不宜放置时间过长。 5. 染色 涂片干燥后，滴加硝酸银染色 A 液覆盖 3～5 min， 用蒸馏水充分洗去 A 液，用 B 液冲去残水后，再加 B 液覆盖涂片染色约数秒至 1 min， 当涂面出现明显褐色时，立即用蒸馏水冲洗。若加 B 液后显色较慢，可用微火加热，直至显褐色时立即水洗。自然干燥。 配制合格的染色剂（尤其是 B 液）、充分洗去 A 液再加 B 液、掌握好 B 液的染色时间均是鞭毛染色成败的重要环节。 6. 镜检 干后用油镜观察。观察时，可从玻片的一端逐渐移至另一端，有时只在涂片的一定部位观察到鞭毛。 菌体呈深褐色。鞭毛显褐色、通常呈波浪形。 展开 |
| 注意事项 | 1. 良好的培养物，是鞭毛染色成功的基本条件，不宜用已形成芽孢或衰亡期培养物作鞭毛染色的菌种材料，因为老龄细菌鞭毛容易脱落。 2. 玻片要求光滑、洁净，尤其忌用带油迹的玻片（将水滴在玻片上。无油迹破片水能均匀散开）。 3. 挑菌时，尽可能不带培养基。 |
