| 实验步骤 |
(一）材料与设备
1) 垂直电泳装置
2) 水浴
3)40% 聚丙烯酰胺溶液: 丙烯酰胺 38 g,N,N-亚甲双丙烯酰胺 2 g，加水至 100 ml，完全溶解后过滤，保存于棕色瓶中
4) 尿素
5) 甲酰胺
6)5XTBE 缓冲液：Tris 碱 54 g, 硼酸 27.5 g，20 ml0.5md/LEDTA(pH8.0)，加水至 1L
7)10X 加样缓冲液:10 mmol/LEDTA(pH8.0)，0.2% 橙 G，50% 甘油
S)10% 过硫酸铵
9)TEMED
10) 染色液 1%AgNO3
11) 显色液:NaOH 10 g，Na2CO3 0.2 g，甲醛 2 ml 加水至 500 ml, 溶解完全后使用，需临时配制。
(二）操作方法
1) 灌胶：根据所分离 RNA 分子的大小、参照寡核甘酸长度与聚丙烯酰胺百分浓度的关系（表 5.1) 选择合适的胶浓度，并根据表 5.2 灌制变性聚丙烯酰胺凝胶
2) 预电泳:200V 条件下恒压电泳 15〜2Omin
3) 电泳: 在 RNA 样品中加入等体积的甲酰胺，振荡混匀，于 55℃ 加热 5 min, 以消除二级结构。加入 10X 加样缓冲液，200V 条件下用 0.5XTBE 电泳缓冲液恒压电泳。
4) 快速银染：电泳结束后，用蒸馏水洗胶两次；加入适量的染色液染色 10 min; 水冲洗 30s, 用少量显色液冲洗; 加入显色液至条带清楚。
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