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包涵体沉淀溶解实验

2020.8.11

试剂、试剂盒 缓冲液 AN-十二烷基肌氨酸钠(SKL)考马斯亮蓝(CBB) 染色液脱色液 快速蛋白质斑点印迹试验用试剂

仪器、耗材 SDS-PAGE 电泳装置聚丙烯酰胺小胶(10%)分子量标准参照物

实验步骤

材料与设备


SDS-PAGE 电泳装置


聚丙烯酰胺小胶(10%)


分子量标准参照物


试剂


缓冲液 A


N-十二烷基肌氨酸钠(SKL)(20% 水溶原液)


考马斯亮蓝(CBB) 染色液


脱色液


快速蛋白质斑点印迹试验用试剂 (见 P.172)


(配方,见「试剂的配制」,PP.184~189)


操作程序


1) 第 2 次 2%D0C 悬液(见 p.149), 于离心前取 6x50-ul 等分试样。然后将这些样品用微型离心机全速离心 1 min, 弃上清。


2) 各沉淀物中分别加入 100ul 含 0%、0.1%、0.2%、0.3% 和 0.6%SKL 的缓冲液 A。沉淀物剧烈重悬后静置 10 min, 再用微型离心机离心 lmin,取上清样品,供快速蛋白质斑点印迹试验用(见 PP.172-173),观察沉淀物的多少。


3) 每份上清作 SDS 凝胶电泳,并与样品 A、B—起做快速蛋白质斑点印迹试验。


4) 作凝胶电泳分析时,于 10% 的 SDS 凝胶上,样品 A、B、C、D 及 0.1%SKL 上清、0.2%SKL 上清、0.3%SKL 上清、0.4%SKL 上清、0.6%SKL 上清各加样 20ul, 分子量标准参照物加样 3ul,120V(20mA) 电泳约 60 min。


5) 凝胶用 CBB 染色液染色 30 min 后,置脱色液中漂洗、脱色,直至显现条带。


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