多项微量简易鉴测技术实验
近二十多年来，国际上研制成功了仅做一次试验就能检测多项反应，或几十项反应，使微生物能很快地、简易地被鉴定，这种技术称为多项微量简易鉴测技术，或简易诊检技术，或数码分类鉴定法。
多项微量简易鉴测技术已广泛用于动植物检疫、食品卫生、环境保护、药品检査、发酵控制、生态研究等方面，尤其是临床检验中深受欢迎，迅猛发展。国际上此技术的产品，或称系统，种类繁多，国内有河南开封医学生物研究所的肠杆菌科细菌鉴定卡 E-15；上海市卫生防疫站的发酵性革兰氏阴性杆菌鉴定系统 SWF-A；中国入民解放军一八一医院的厌氧菌快速生化鉴定系列 ARB-ID；深圳华士达生物科技有限公司的肠杆菌科的细菌生化鉴定卡 ENT 等。国外的产品已标准化、系统化和商品化，主要有法国生物一梅里埃集团的 API/ATB；瑞士罗氏公司的 Micro-ID，Entemtube，Minitelk，美国的 Biolog 全自动和手动细菌鉴定系统；日本的水中大肠杆菌快速鉴定板等，其中 API/ATB 包括众多的鉴定系统，共计有 750 种反应，可鉴定几乎所有的细菌＋多项微量简易鉴测技术优点突出，不仅能快速，敏感、准确、重复性好地鉴检微生物，而且简易，节省入力，物力、时间和空间，缺点是各系统差异较大，有的价格贵，有的个别反应不准，难判定，但毫无疑问，它是微生物学技术方法向快速、简易和自动化发展的重要方向之一。
| 实验方法原理 | API 20E 系统是 API/ATB 中最早和最重要的产品，也是国际上应用最多的系统，本实验用它检验细菌。该系统的鉴定卡是一块有 20 个分隔室的塑料条，分隔室由相连通的小管和小环组成，各小管中含不同的脱水培养基、试剂，或底物等，每一分隔室可进行一种生化反应，个别的分隔室可进行两种反应，主要用来鉴定肠杆菌科细菌，如图 1 所示。
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|---|---|
| 实验材料 | |
| 试剂、试剂盒 | |
| 仪器、耗材 | |
| 实验步骤 | 1. 将待检验的单个或多个菌落用无菌水配制成 1.5 亿或大于 1.5 亿的菌惫液，混合均匀。 2. 将 API 20E 鉴定卡的密封膜拆除，在卡上标明检验菌号、日期和试检者。 3. 用无菌毛细管吸配制好的菌液，沿分隔室的小管内壁稍微倾斜地缓缓加入小管中，装满各个小管，而对鉴定卡上的试验名称加有方框线条的小杯，则还要加满菌液，对试验名称下有一条横线的小杯则要加满液体石蜡。 加液时避免形成气泡，如果形成了气泡，则轻轻摇动除去，切勿用吸有菌液的毛细管除去气泡。4. 将接种的鉴定卡放入装有少量水的塑料盒或浅瓷盘中（防反应液蒸发），置 37℃ 孵育。 5. 孵育 18～24 h 后，在需要添加试剂的小杯中加入指定的试剂，如 IND 反应加入 IND 试剂，V.P. 反应加入 V.P. 试剂。观察鉴定卡上各项反应的变色情况，根据反应判定表（表1）判定各项反应是阳性或阴性反应。 6. 按鉴定卡上反应项目的顺序，每三个反应项目编为一组，共编为七组，每组中每个反应项目定为一个数值，依次是 1、2、4，各组中反应阳性者记「+」，则写下其所定的数值，反应阴性者记「—」，则写为 0，每组中的数值相加，便是该组的编码数，这样便形成了 7 位数字的编码，见表 2 举例说明。 7. 用 7 位数字的编码査检索表，或输入电脑检索。则能将检验的细菌鉴定是什么菌种。 展开 |
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