常见免疫技术鉴析及化学发光纳米磁微粒（二）
电化学发光（ECL）是电场参与化学发光所产生的结果，是指通过施加一定的电压进行电化学反应：体系中电极表面的三丙胺TPA释放电子，进而释放质子成为自由基TPA＊，同时，二价的三联吡啶钌[Ru(bpy)3]2+ 释放电子成为三价的三联吡啶钌 [Ru(bpy)3]3+。
具有强氧化性的三价的三联吡啶钌 [Ru(bpy)3]3+ 和具有强还原性的三丙胺自由基 TPA＊发生氧化还原反应，结果使三价的三联吡啶钌 [Ru(bpy)3]3+ 还原成激发态的二价的三联吡啶钌[Ru(bpy)3]2+，激发态 [Ru(bpy)3]2+衰变并以释放出波长为 620nm 光子的方式释放能量，而成为基态的 [Ru(bpy)3]2+。
上述化学发光过程后，反应体系中仍存在二价的三联吡啶钌 [Ru(bpy)3]2+ 和三丙胺TPA，使得电极表面的电化学反应过程可以继续进行。这样，整个反应过程可以不断循环，测定信号不断放大，从而使检测灵敏度大大提高，所以 ECL 测定具有高灵敏的特点。
是将磁性分离技术、化学发光技术、免疫分析技术三者结合起来的一种新兴分析方法，该技术充分利用了磁性分离技术的快速易自动化性，化学发光技术的高灵敏度性，以及免疫分析的特异性，在生物分析领域展现了不可替代的作用。
目前，磁微粒化学分析免疫分析已经应用于管式化学发光免疫检测项目以及电化学发光免疫检测项目。
间接法
间接法就是包被抗原，然后用酶标记的抗抗体检测样本中抗体，适合于检测对象是自身抗体的情况。
优点：相对较方便，只要变换包被抗原就可以检测不同的项目。
缺点：标本中的特异性抗体会竞争性的结合抗原，使结果出现假阴性。
捕获法
血清中针对某些抗原的特异性IgM常和特异性IgG同时存在，后者会干扰IgM抗体的测定，因此测定IgM抗体多用捕获法。
原理如下图，先将所有血清IgM（包括异性IgM和非特异性IgM）固定在固相上，去除IgG后测定特异性IgM。
固相抗原竞争法
指受检抗体和酶标抗体竞争性的与磁珠表面抗原结合。固相抗原竞争法基本原理如下图所示。结合于固相载体的酶标抗体与受检抗体的量呈反比。
若受检样本中无抗体，酶标抗体能够顺利与抗原结合，出现强信号。若受检样本中有抗体，则竞争性的占去了酶标抗体与抗原的结合，酶标抗体的结合力减弱，信号强度减弱。
双抗夹心法（两步法）
双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，基本原理如下图所示。
双抗夹心法（一步法）
在一步法测定中，应注意钩状效应（hook effect），类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象。当标本中待测抗原浓度相当高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，而不再形成夹心复合物，所得结果将低于实际含量。钩状效应严重时甚至可出现假阴性结果（如图， 双抗夹心法及双位点一步法。缺点：假阴性）
