分离和培养人角膜内皮细胞实验——分离人角膜内皮细胞
| 实验材料 | |
|---|---|
| 试剂、试剂盒 | CMF-SalineG胰蛋白酶 EDTADMEM F-12 GASPDMEM F-12 2FB:DMEM:Ham’sF-12 1:1 含2%FBSCMF GASP |
| 仪器、耗材 | 手术刀或单刃安全刀片弯虹膜剪 11cm(4-3 8 in.)Jeweler’s慑子 10cm(4 in.)角膜剪 19mm刃 尖头Colibri缝线钳0.1 mm |
| 实验步骤 | (a)用PBSA将角膜清洗3次，每次5 min。 (b)剪除残留的巩膜，结膜和虹膜。 (c)加人2 ml 1.2 U/ml中性蛋白酶II，4℃过夜，轻微搅动。 (d)将加人中性蛋白酶II的角膜放人4℃摇床摇30 min。 (e)用DMEM/F-12/GASP清洗角膜。 (f)解剖显微镜下，小心去除小梁网，剥离内皮层并用胰蛋白酶/EDTA消化37℃，30 min。 (g)加入同等体积的DMEM/F-12/2FB并拍散细胞。 (h)离心400g,10 min,弃去上清。 (i)加人1 ml培养基，轻柔的重悬细胞并计数。 |
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