白色念珠菌的实验室分离及注意事项
白色念珠菌即假丝酵母菌是假丝酵母菌病的病原菌。假丝酵母菌病在世界各地均有报告，发生于一切年龄、一切种族的男女中。因病原菌感染部位不同，可引起皮肤、黏膜、支气管或肺发生病变，有时甚至引起败血症、心内膜炎、脑膜炎或其它内脏的炎症。假丝酵母菌属包括白假丝酵母菌、热带假丝酵母菌、伪热带假丝酵母菌、克柔假丝酵母菌、副克柔假丝酵母菌、类星型假丝酵母菌和季利蒙假丝酵母菌。假丝酵母菌病主要是由白假丝酵母菌引起。假丝酵母菌为芽生，有假菌丝，可产生厚膜孢子，但不产生子囊。
【分离方法】
取刮屑、拭子或痰、脓等临床标本接种于加有青、链霉素的沙保葡萄糖琼脂平板上，置37℃和室温培养。经2天～4天，可见乳酪样、中等大小、湿润呈暗淡无光的菌落长出，有明显的酵母样气味。
【鉴定方法】
1. 直接检查：一般用于浅部假丝酵母菌病，取口腔病灶黏膜、阴道分泌物、皮屑、甲屑，也可作血、尿、粪、脑脊液、胸水、活组织或尸体解剖材料。制作KOH溶液或盐水盖玻片标本，观察有无圆形或卵圆形的芽生孢子，有的亦可发现假菌丝或厚膜孢子。若查到大量假菌丝表明假丝酵母菌处于致病阶段，对确诊有一定意义.。革兰染色阳性，着色不均匀。
2. 培养检查
⑴ 在沙保葡萄糖琼脂培养基上,于室温及37℃培养均能生长, 逐日查看菌落生长情况。菌落为酵母样菌落，呈奶油色，柔软而光滑，陈旧培养物则颜色变深并逐渐变硬或有皱褶。镜检见有假菌丝及成群2～4μm×6μm大小的孢子（见图29-1A）。
⑵ 在琼脂培养基上，则需10天左右才能形成中等大的暗色菌落。
⑶ 在玉米琼脂或米粉吐温琼脂培养基,于室温培养，经25～28℃孵育24～48小时后生长出灰白色菌落，可查见有厚膜孢子形成。假丝酵母菌中仅白假丝酵母菌产生厚膜孢子，这是鉴定白假丝酵母菌的重要特征。
⑷ 接种于0.2～0.5 mL人或动物血清中，37℃孵育3小时（不超过4小时），取一接种环血清在显微镜下观察是否形成芽管。
⑸ 在含0.005%氯化三苯基四氮唑的葡萄糖蛋白胨琼脂上，接种物如为白假丝酵母菌，培养基不变色或仅呈淡红色，而其它假丝酵母菌变为红色。
3． 厚膜孢子形成实验
材料：玉米-吐温80琼脂（配方及配制方法见附录）及待检菌
方法：
（1） 将培养基加热溶化，取适量置于洁净的载玻片上，待凝固。
（2） 将待检菌按水平方向穿刺接种于培养基内。
（3） 将接种物置潮湿平皿内，室温孵育24～72小时。
（4） 将载玻片置显微镜下观察。
（5） 观察结果。
4． 芽管形成实验
材料：无菌人血清及待检菌。
方法：在载玻片上加1滴无菌人血清，接种少量待检菌，盖上盖玻片，将其置潮湿平皿内，35℃培养箱孵育，每隔1小时取出观察芽管形成情况。
5． 动物接种：在假丝酵母菌属中，只有白假丝酵母菌对实验动物有致病性。静脉接种1mL白假丝酵母菌1%盐水混悬液于家兔，4天~5天内家兔可死亡，解剖可见肾脏肿大，有许多白色小脓肿分布在肾皮质上。注射于家兔皮内，于48小时可形成脓肿。白假丝酵母菌盐水悬液静脉注射或悬于5%猪胃粘液素中腹腔接种，对小白鼠有致病性。
6． 血清学检查：
（1） 假丝酵母菌凝集实验：以杀死的白假丝酵母菌作抗原实验。有60%～75%病例其双份血清滴度有4倍增长，正常人亦有低效价凝集素存在。
（2） 假丝酵母菌沉淀实验：用对流电泳或免疫扩散法，用白假丝酵母菌细胞壁甘露聚糖或酵母细胞胞质抗原进行实验，敏感性和特异性均好。
【判定标准】
1. 依据在玉米琼脂上的生长物检出假菌丝和厚膜孢子，可定为白假丝酵母菌。
2. TTC沙保琼脂上生长，培养基不变色或仅呈淡红色，可定为白假丝酵母菌。
3. 在血中或脊髓液中查到假丝酵母菌可以确诊。
4. 假丝酵母菌沉淀实验可诊断全身性假丝酵母菌病。
【注意事项】
1. 从痰中分离出白假丝酵母菌不能作为假丝酵母菌病的唯一根据，应结合临床作出判定。
可根据对葡萄糖、乳糖、麦芽糖、庶糖等发酵实验和培养特征对假丝酵母菌属的菌种作出鉴别。
