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培养细胞的染色实验——Giemsa染色法

2019.4.04

实验方法原理	Giemsa 染色是最常用的方法之一，它简便、快速，适用于多种细胞和染色体染色。
试剂、试剂盒	Giemse 甘油甲醇 Sorensen
仪器、耗材	滴管玻璃片
实验步骤	1. 染液制备（1）称Giemse粉0.5 g、甘油22 ml，在研钵内先用少量甘油与Giemsa充分混合，研磨至无颗粒；（2）再将剩余甘油混在一起；56 ℃保温2 小时后，加入33 ml纯甲醇，保存于棕色瓶内。 2. 染色步骤（以盖片培养法或涂片法为例）（1）用pH6.8~7.38的Sorensen缓冲液，按1：9 比例取Giemsa染液和Sorensen缓冲液混合配成染色液；（2）细胞标本用甲醇固定10 分钟，或1：3醋酸/甲醇固定30 分钟，用滴管把染色液布满玻片上（注意不要有气泡，用染色缸染色亦可）；（3）染10~15 分钟后，用自来水冲去玻片上多余的染料，空气干燥、二甲苯透明、光学树脂胶封固。 3. 结果胞核染成紫红色或蓝紫色，胞浆染成粉红色。展开
注意事项	1. 染色液宜现用现配，保存时间最好不超过48 小时，旧染液染色效果不好。 2. Giemsa 对pH 极敏感，缓冲液pH 值要调准确，否则染色效果不好。 3. 用染色缸染色时，随染色时间的延长，在染液表面常形成一层氧化膜（发亮），这层氧化膜易附在片上形成污秽，且不易除掉。因此在用染色缸染色，尤其用的不是现配者时，染色前应先用小片滤纸刮除液面的氧化层再进行染色。 4. 染色完毕，应把标本浸入水中洗除染液，或用自来水直接冲掉多余染液。展开

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