DNA斑点和狭线印迹实验
多样抽滤法
| 实验方法原理 | 斑点和狭线印迹是一种将混合的未经分离的面定于硝酸纤维素膜或尼龙膜上进行杂交分析的技术。 |
|---|---|
| 实验材料 | DNA |
| 试剂、试剂盒 | SSC NaCl NaOH Tris·Cl |
| 仪器、耗材 | 紫外透射仪 电泳仪 多样抽滤加样器 |
| 实验步骤 |
1. 裁一张与多样过滤加样器一样大小的尼龙膜，将膜置于6xSSC的表面让其自然浸没。放置10 min。
2. 裁一张与多样过滤加样器一样大小的Whatman 3 MM 滤纸，用6xSSC浸湿。
3. 将Whatman 3 MM 滤纸置于多样抽滤加样器上，将膜放置于其上。将多样抽滤加样器按厂商说明书安装好，确保装置中不漏气。
5. 连接吸液装置与多样抽滤加样器，每孔中加入500 ul 6xSSC。
6. 将DNA样品离心5 s，将样品加于各孔中，小心勿让吸头触及膜，让样品滤过。
8. 将膜转至一张浸过中和液的的Whatman 3 MM 滤纸上。放置5 min。
10. 将尼龙膜置于可透过紫外线的塑料夹层中，将有DNA的一面朝下置于紫外透射仪上照射适当的时间以固定DNA。
11. 将晾干的膜夹于Whatman 3 MM 滤纸之间，室温下可保存数月。
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| 注意事项 |
在膜上阳性反应呈带状。实验中应注意以下问题：转膜必需充分，要保证DNA已转到膜上。杂交条件及漂洗是保证阳性结果和背景反差对比好的关键。洗膜不充分会导致背景太深，洗膜过度又可能导致假阴性。若用到有毒物质，必需注意环保及安全。
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| 其他 |
主要应用 1.遗传病诊断 2.DNA图谱分析 3.检测样品中的DNA及其含量 4.PCR产物分析
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