单向、双向免疫琼脂扩散和免疫电泳-2
二、实验材料
1%琼脂（生理盐水配制）管，每管约4ml
载玻片
打孔器及打孔模板
微量加样器及塑料吸头
抗原：0.5μg/ml 牛血清白蛋白（BSA）、0.5μg/ml 人血清白蛋白（HSA）
抗体：兔抗人血清白蛋白加兔抗牛血清白蛋白
湿盒
三、实验方法
1．将已溶化的1%盐水琼脂管放58°C -60°C 水浴箱中平衡温度备用。
2．将载玻片置于水平桌面上，倾注已溶化琼脂3.5-4ml，使成厚度约1.5mm 琼脂板（注意：倾注速度不要过快，以免琼脂溢出载玻片；倾注过程要连续以保证琼脂板均匀、平滑）。
3．琼脂凝固后，将打孔模板置于琼脂板下，然后用打孔器打孔，根据不同需要可制成三角型、方阵型或梅花型。本次试验采用三角型（如图），即每三个孔组成一个三角型。（因本次实验所制备的琼脂板均以载玻片为底板，故根据其大小只能采用三角型且每一琼脂板也只能打孔两组。否则，如采用方阵型或梅花型则因琼脂板边缘琼脂厚度不够而使周边各孔所加抗原或抗体量不足或溢出，而制成三角型三组，因各孔相距过近，抗原、抗体相互渗透扩散将影响结果的判断）。
4．如图2 所示，用微量加样器加10μl 抗体于各组一孔中，每组所余两孔各按抗原1、2 为一组，3、4 为二组，5、6 为三组，分别各加入10μl。注意每加一样品均需更换吸头，以防止交叉污染，影响实验结果。
5．作好标记，放湿盒中，置37°C 温箱，24 小时后观察结果。
四、实验结果
1．融合性沉淀孤，说明两孔中抗原相同，为同一性反应（图2-1）。
2．两沉淀线独自形成并形成交叉，说明两孔中的抗原完全不同，为非同一性反应（图2-2）。
3. 融合性沉淀弧出现支线，或同时有另一条或两条沉淀线，说明两孔中抗原有相同成分又有不同成分，此为部分同一性反应（图2-3）。
双向免疫扩散沉淀线（图2）
（三） 免疫电泳(Immunoelectrophoresis)-示教
一、基本原理
免疫电泳法是将凝胶电泳与双向免疫扩散两种技术相结合的一种实验方法。在电场作用下标本中各组分因电泳迁移率不同而分成区带，然后沿电泳平行方向将凝胶挖一沟槽，将抗体加入沟槽内，使抗原与抗体相互扩散而形成沉淀线。根据沉淀线的数量、位置及形状，分析标本中所含各组分的性质，本实验常用于抗原分析及免疫性疾病的诊断。
二、实验材料
1%离子琼脂（pH8.6 巴比妥缓冲液加入等量蒸馏水，再加入1%琼脂。溶解
后用脱脂棉过滤，分装，实验前加热溶解置56℃-60℃水浴箱中平衡温度备用）。
免疫电泳用玻片
待检血清
人IgG(1mg/ml)
抗人全血清抗体
微量加样器及塑料吸头
尖吸管及橡皮吸头
打孔器、解剖刀、尺、打孔模板、湿盒等。
电泳仪：将pH8.6 巴比妥缓冲液注入电泳槽内（注意正负极各槽内所加入的量应在同一水平）。并将滤纸裁至适当长度和宽度以备搭桥使用。
三、实验方法
1．将溶化的1%离子琼脂倾注于玻片上制成琼脂板。
2．琼脂板冷却凝固后，按照模板于挖槽线上下两侧各打一个孔，并分别用微量加样器加入待检血清及人IgG 各15ul。
3．将琼脂板置于电泳槽内，注意电泳标本应放负极“―”一侧。并将已浸透缓冲液的滤纸一端覆盖于琼脂板两侧各约0.5cm,另一端浸于电泳液中。
4．接通电源，电压、电流及电泳时间应视仪器性能而定。一般电势梯度6V/cm，电流每板20mA，泳动时间1-2 小时。
5．电泳完毕，关闭电源，取出琼脂板，按模板位置用解剖力挖横槽。用特制尖吸管加入抗人全血清抗体。
6．将琼脂板置于湿盒中，于37℃温箱中扩散24 小时。
四、实验结果
根据沉淀弧的位置及形状，参照免疫球蛋白迁移范围示意图，识别主要Ig。
