气相色谱法测定菜籽油中BHA和BHT的前处理方法的改进
BHA和 BHT是油脂中常用的合成酚类抗氧化剂,世界各国对其限量使用有着严格的规定,我国的标准方法是 GB/T 5009.30--2003(食品中叔丁基羟基茴香醚(BHA)与 2,6一二叔丁基对甲酚(BHT)的测定》,目前,随着分析检测手段的提升,很多检验单位的气相色谱仪未配置填充柱进样口。但该方法中色谱柱不仅是填充柱,而且样品的前处理时问过长。为此,本文针对样品前处理时间较长的问题,用甲醇或乙腈提前法改进该方法的前处理,并用毛细管柱替换填充柱进行比对验证试验,方法前处理的改进和实验数据对今后检测菜籽油中 BHA和 BHT有一定的应用意义。
1 材料和方法
1.1 仪器
气相色谱仪:岛津 GC2010、带 FID检测器、自带色谱工作站;气相色谱检测条件:hp一5毛细管色谱柱(30 m×0.32 um×0.25 am),柱温程序升温(80°C,0 min,20°C/min,230°C,10 min),进样 口温度 200~(2、检测器温度280~(2;氮气(N )流速40 mL/min,氢气(H2)40 mL/min,空气 450 mL/min,进样体积0.5 IxL。
1.2 试剂和材料
@BHA、BHT混合标准液:准确称取 BHA、BHT各 0.1000 g混合后用二硫化碳溶解,定容至 100mL,此溶液分别为每毫升含 1.0 mg BHA、BHT,置冰箱贮藏应用时吸取原液4 mL于 100 mL容量瓶中,用二硫化碳定容至 100 mL,此容液分别为每毫升含 0.040 mg BHA、BHT,置冰箱中贮藏;②常用试剂二氯甲烷、正己烷、乙腈、甲醇和石油醚;③层析柱:1 cm x30 cm玻璃柱、带活塞,加入少量玻璃棉于层析柱底部,再加少量无水硫酸钠,然后称取 6 g硅胶和4 g弗罗里矽土(用前均于 120~C活化),用石油醚湿法混合装柱,柱顶部再加入少量无水硫酸钠;④比色管10 mL和梨形分液漏斗 125 mL;⑤菜籽油,市售,经检测不含有 BHA、BHT。
1.3 样品前处理
样品分别用柱层析法、甲醇提取法和乙腈提取法三种方法进行前处理。
质量控制
1.3.1 柱层析法 称取混合均匀样品 1.00 g放人50 mL烧杯中,加25 mL石油醚溶解转到层析柱上,再用 10 mL石油醚分数次洗涤烧杯并转移到层析柱,用 100 mL二氯甲烷分5次淋洗 ,合并淋洗液,浓缩近干,用二硫化碳定容至 2 mL,进行气相色谱分析。
1.3.2 乙腈提取法 称取均匀样品 1.O0 g置于125 mL梨形分液漏斗中,加 5 mL正己烷溶解油样,用乙腈分 2次提取,每次 10 mL合并提取液,在旋转
蒸发器上浓缩近干,定容至 1 mL进行气相色谱分析。
1.3.3 甲醇提取法 称取均匀样品 1.00 g置于125 mL梨形分液漏斗中,用甲醇分 2次提取 ,每次10 mL合并提取液,在旋转蒸发器上挥发近干,定容止 1 mL进行气相色谱分析。
1.4 操作方法
样品分别用柱层析法、甲醇提取法和乙腈提取法三种方法进行前处理,用 1.1规定的仪器和色谱条件进行色谱分析。
2 结果和讨论
2.1 曲线线性关系和检测限测定 t将标准贮备液用二硫化碳配制成一组标准系列,其浓度为 0.02、0.04、0.06、0.08、0.10 mg/mL,进样0.5 进行气相色谱分析。用峰面积与浓度进行线性回归分析 Y =aX +b,BHA和 BHT的相关系数 r均大于0.999(见表 1),从图 1可以看出检测成分在 6.4~7.0 min之间,能有效消除样品中其他成分的干扰,表明用 hp一5毛细管色谱柱可以达到很好的分离效果;将标准贮备液用二硫化碳配制成一个较低浓度(0.01 mg/mL)BHA、BHT混合标准液,进行气相气谱测定,连续测定 3次 ,以 3倍的噪声值作为方法的最低检测限,检测限均可达到0.5 ug。
2.2 回收率测定
将一定量的BHA、BHT混合抗氧化剂加入不含有 BHA、BHT的食用油脂 中,制成 0.05、0.1、0.2kg 3个浓度的加标样品,每个浓度取 3个平行样品,样品经三种前处理方法处理后,应用气相色谱仪分析测得平均回收率在89.5%~98%之间,回收效果良好(见表 2)。
表2 检测方法回收率试验
2.3 讨论
按照国标方法中柱层析法测定菜籽油中的 BHA和 BHT前处理过程比较复杂,而且时间较长(一般在 1—2天),同时需要大量溶剂(100 mL石油醚,200 mL二氯甲烷),而乙腈提取和甲醇提取法则仅
需要20 mL乙腈或甲醇,分 2次提取只需数十分钟;(见表 3三种前处理方法比较)因此我们认为乙腈提取法和甲醇提取法优于柱层析法;但乙腈的价格高于甲醇,而毒性较甲醇大,我们认为甲醇提取法更为适合。
3 结论
三种前处理方法均适用于同时测定 BHA和BHT,可以相互替代,甲醇提取法则更加快速;用hp一5毛细管色谱柱(30 m×0.32 Ixm×0.25 m)测定实验植物油中的抗氧剂 BHA、BHT,能有效消除样品中其他成分的干扰,可以达到很好的分离效果,检测时问在 10min之内。
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