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盐酸的确定方法

2021.7.19

要通过某波长的吸光度来测定在某种溶剂中的某物质浓度,有两个必要条件:1、该物质在某波长有吸光度;2、该物质在该波长的吸光度(在一定浓度范围内)有浓度依赖性。

这里我用我自己通过吸光度测过的某物质浓度作为例子来说明:

该有机物质A可溶解在乙醇中,暂时没有别的方法定量检测这种物质,所以我想到了用吸光度来测定其浓度。我用的是酶标仪,应该也可以使用紫外分光光度计。

首先你要知道物质A都在哪些波长有吸光度,也就是你应该先对物质A的乙醇溶液扫个全波长的紫外光谱图:

这是200mg/ml A的乙醇溶液的光谱图,出峰在200-300nm之间。(第一个必要条件)(扫峰的精度可以较低,如每10nm测一个点)

接下来我配置了不同浓度的A的乙醇溶液,提高精度(如每2nm一个点)扫一下200-300nm之间的峰:

浓度较高时出峰位置会红移,并且OD值过高时也不呈线性。降低浓度继续测:

10mg/ml以内时红移依然存在,但1mg/ml以内时OD maximun值基本在同一波长(204nm),而且看起来线性比较好,于是我选取这个范围的浓度-OD值来作标准曲线:

线性良好,于是我就可以用这个标准曲线去测定未知浓度的A溶液在204nm的OD值,从而计算其浓度了。(前提是该未知浓度在1mg/ml以内,如果高于此浓度要稀释,如果过高就不适合用这个方法测定了,误差过大。)

这就是用吸光度测定物质浓度的过程和原理。所以回答你的问题:
如果不是物质的出峰位置,比如我这里的A物质,它再200-300nm之间出峰(有吸光度),你如果测500nm,浓度再高测出来也是0;你如果测230nm,线性不一定好。

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