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食品中罂粟壳成分检测方法的研究

2018.6.27

　　摘要：本文简单介绍了罂粟壳生物碱成分及危害以及食品中添加罂粟壳成分的近况，评述了食物中婴粟壳成分的大部分检验方法，展示了近几年来我国在食品检测方面的研究现状与进展。
　　引言
　　婴粟壳是婴粟果实晾干所成的。因为罂粟壳具有止咳镇痛等药用价值，在中药配方中也经常用得到。但部分不法商家为了谋取自身的利益，在各种食物以及调味料中加入罂粟壳。我国法律禁止在食品或调味品中添加含有罂粟壳成分的物质。我国急需创立快速检测食品中罂粟壳等成分含量的方法。
　　1 罂粟壳生物碱成分及危害
　　罂粟壳（Pericarpium Papaveris），又名“御米壳”，俗称“米壳”。为植物罂粟（Papaver somniferum L.）的干燥成熟果壳。含有20多种生物碱，其中以吗啡（Morphine，5.6%～12.83%）、可待因（Codeine，0.63%～2.13%）、那可丁（Narcotine）、罂粟碱（Pa-pavarine）等为主要成分。
　　对吸毒成瘾的人来说，食用含有罂粟壳成分的食品并没有什么作用，但是对没有接触过毒品的人来说，危害却是十分大的。这些人吃了含有罂粟壳成分的食品之后，多多少少都会产生轻快的感觉，表现在身体且各有不同，一些人可能面部略微发红，一些人可能会心跳加速，一些人可能容易打盹，而一些人可能容易失眠。人们长期食用这种食品，可能会表现出发冷、乏力、出虚汗、面黄肌瘦等症状；严重时，可能会损害到人自身的生理系统，出现内分泌失调等症状，导致上瘾，给社会造成了十分不好的影响。
　　2 食品中掺入罂粟壳的近况
　　2016年1月20日，国家食药监总局在官网发布通告称，发现我国35家餐饮服务单位存在涉嫌违法添加行为，其经营的食品中含有罂粟壳中罂粟碱、吗啡、可待因、那可丁、蒂巴因等成分。
　　3 食品中罂粟壳成分的检测方法
　　3.1 分光光度法（UV-Vis）
　　吗啡酚羟基在酸性水溶液中与NaNO？生成亚硝基吗啡，在氨碱性条件下显黄棕色，同时在420nm处用2cm比色池进行比色，在吗啡浓度0―10mg/100mL范围内吸光度与浓度之间存在线性关系。该法检出限吗啡0.1mg/100mL，罂粟壳1g/100mL。线性范围：吗啡0.1-10 mg/100mL，罂粟壳1-5 g/100mL。该法过程繁琐复杂，且吗啡含量受多因素影响，只能定性和半定量测定。
　　3.2 薄层色谱法（TLC）
　　精密称取取罂粟籽和壳粉末样品各10g，分别放于索氏提取器中并加入95%的乙醇200ml，放在水浴锅中回流提取8h，蒸除溶剂（使液休总体积在5ml以下），放冷后转移至10ml容量瓶中，加入95%的乙醇至刻度线处，摇匀。取4μl点样于硅胶板上，展开之后扫描测定。将样品和加入已知量生物碱的样品分别提取，点样，展开及扫描测定，用差减法求出加入各生物碱的回收率。由结果看出，该方法具有较高的回收率。比较每种生物碱的三次测定结果还可以看出，该方法具良好的重现性。
　　3.3 纸层色谱测定法
　　取17x18cm新华滤纸一块，在距底端2.5cm处划一线，在线上用微量注射器点样5μl，在样斑两侧分别点加空白样品氯仿提取物及0.05、0.1、0.3μg婴粟碱对照样，所点样斑直径<3mm，将滤纸卷成筒状，用钉书机将纸筒固定。在层析缸中加入展剂（2%柠檬酸氢钠：丁醇10：0.5），加盖后稍加摇动，静置10min，将滤纸筒放入，待展剂上升10cm时取出层析纸，挥去展剂，在254nm荧光灯下观察，婴粟碱呈绿色荧斑，Rf0.71。气相色谱法的灵敏度高于纸层色谱法，其正反应检出率（30.0%）亦高于纸层色谱法。由于气相色谱仪目前尚未普及，纸层色谱法在基层仍不失为简便易行检查婴粟壳的筛选方法。
　　3.4 高效液相色谱法（HPLC）
　　高效液相色谱法的样品提取和薄层色谱法相同，用HA～0.45μm滤膜过滤。推荐的色谱条件为：色谱柱HPODSHypersil（Φ5μm，200×4.6mm），流动相：乙腈：磷酸盐缓冲液（45：55），流速为1.0ml/min，紫外检测器（230nm），检测灵敏度为0.004AUFS，最低检出量1.1ng。
　　3.5 实时荧光PCR
　　选取常见的用于配制复合调味粉的调味料，包括花椒、辣椒、甘菘、沙仁、香叶、小茴香、桂皮、草果、豆蔻、八角、孜然、迷迭香，常规PCR扩增检测引物特异性。将罂粟壳基因组DNA调整浓度为100ng/μl，梯度稀释成10ng/μl，1ng/μl，100pg/L，10pg/L，1pg/L共5个浓度梯度，进行灵敏度试验。将罂粟壳样品研磨成粉碎状处理后，根据重量比的不同分别添加到不含罂粟壳成分的五香粉基质中，制备成100%，10%，1%，0.1%，0.01%共5个梯度含量的样品，进行检出限试验。
　　3.6 气相色谱质谱联用法（GC- MS）
　　用气相色谱质谱联用中SIM模式进行离子提取，将罂粟壳加入正常的火锅汤底作为阳性样品，模拟罂粟壳加入各种汤底组成中的方法，萃取液用三种组合的有机溶剂分别充当，定性检测汤料中的可待因、吗啡、蒂巴因、罂粟碱、那可汀等生物碱。结果：在罂粟壳加入量同等时，罂粟壳生物碱响应值最高的是无油稀汤底，最容易被检测出；罂粟生物碱提取效果最好的是用氯仿+乙醇（9+1）作萃取液；用可待因作为检出指标，检测灵敏度最高。
　　3.7 液相色谱质谱联用法（LC- MS）
　　样品经过QuEChERS方法提取、净化后，采用超高效液相色谱串联三重四极杆质谱仪（UPLC-MS），在多反应监测（MRM）模式下，通过色谱、质谱条件优化及方法学考察，建立了高效、准确检测火锅调料中非法添加罂粟壳等相关成分的方法。结果本方法的线性范围为：那可丁2.470～49.405ng/ml，r=0.9994；罂粟碱2.090～41.804ng/ml，r=0.9995；蒂巴因2.042～40.840ng/ml，r=1.000；可待因11.287～225.733 ng/ml，r=0.9996；吗啡10.420～208.400ng/ml，r=0.9999。回收率78.4%～100.6%。
　　4 结语
　　本文综述了食品内含婴粟壳成分的大部分检验方法，展示了近几年来国内食品检验的研究现状与进展。目前国内检测食品中罂粟壳含量的检测技术大致分为四大类：纸质色谱法、薄层色谱法、高效液相色谱法、示波极谱法。各有各的优缺点，薄层层析法适合快速检验，高效液相色谱法适合准确的定量分析，都值得今后更多的推广和应用。
　　参考文献
　　[1]汪芳芳，呙亮，曾爱明，杨勇，江小明.食品中罂粟壳残留检测的研究现状[J]. 现代商贸工业， 2009（3）：279-280
　　[2]孙春蕾.常见食品检测技术分析[J].南北桥，2009（8）：172-173
　　[3]张忠会.罂粟壳生物碱的可见分光光度法的测定[J]. 中成药志，2002：537
　　作者简介：
　　魏雅涵（1997.07― ）女，浙江杭州，本科，中国计量学院现代科技学院学生，研究方向：生物工程。