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多聚螯合物酶组化实验——EPOS 法

2019.3.28

长期以来，许多的研究者希望 IHC 方法更敏感、更稳定、更简单，要求多步检测系统简化，但敏感性要进一步提高，使这一技术面临巨大的挑战。在实践中，往往是步骤减少了，敏感性也降低，这是一对矛盾。

一种新的多聚螯合物酶二步法在 1995 年被隆重推出，该方法与简单的二步法相比较，具有很高的敏感性、稳定性和特异性。

另一种是以多聚糖为骨架的多聚螯合物，主要用于 PowerVision 法，其敏感性好于 EnVision 法。

第三种是以氨基酸类为骨架的多聚螯合物，主要用于 UIP（universal immunoperoxidase polymer）法，其敏感性基本与 PowerVision 法相同。

实验方法原理	采用一种具有惰性的多聚化合物（葡聚糖）为骨架，将特异性抗体和 HRP 结合在一起，形成 HRP-多聚化合物-特异性抗体巨大复合物，该复合物内不含第二抗体及亲和素。染色时，只需在组织切片上加入相应的酶标记特异性抗体 EPOS 试剂，孵育 30～60 min 即可完成。勿需再加酶标记第二抗体。
实验材料	石蜡切片
试剂、试剂盒	蛋白酶 PBS 蒸馏水 H2O2 Dako EPOS HRP 试剂 DAB 树胶二甲苯乙醇
仪器、耗材	滴管玻片
实验步骤	1. 石蜡切片常规脱蜡至水，PBS 洗 3 min×3 次。 2. 蛋白酶消化或抗原修复（AR），PBS 洗 3 min×3 次。 3. 0.3％过氧过氢（H₂O₂）处理 5 min。 4. 蒸馏水洗，置于 PBS 中洗 5 min。 5. 加入相应的 Dako EPOS/HRP 试剂，室温孵育 30～60 min。 6. PBS 洗 3 min×3 次。 7. 0.04％ DAB- 0.03％ H₂O₂ 显色 8～12 min。 8. 水洗，复染，常规树胶封片。展开