高效液相色谱法检测大豆油中脂肪酸
介绍了一种高效液相色谱法测定大豆油中脂肪酸含量的方法。油经皂化后，不经萃取直接生成脂肪酸苯乙酮醌，经梯度浸出。大大缩短了分离时间。该方法可直接应用于生物样品。
一、仪器和试剂
高效液相色谱仪，配紫外检 测器。
擦榈酸＞ 99％，
花生酸 ＞ 99％，
硬 脂 酸＞ 99.5％，
亚 油 酸＞ 99％，
亚 麻 酸＞ 99％，
油酸＞ 99，
溴丙酮（CP），使用前与正戊烷重结晶。
三乙胺（CCP），经预蒸馏纯化..其他试剂均为甲级。
二、标准样的制备
称重棕榈酸、油酸、亚麻酸各0.015 g，硬脂酸0.005 g，花生四烯酸0.001 g，混合10 ml n-硅烷。将0.3ml的混合物用氮气干燥浓缩，以酚酞为指示剂，用0.1mol/L氢氧化钾乙醇溶液中和至终点，然后在N:下吹1000进行酯化反应。
三、样品的前处理
取大豆油0.05ml，用0.5mol/LKOH乙醇溶液回流30 min取0.3ml冷却液，以酚酞为指示剂，用盐酸乙醇4:1v/v溶液中和至终点用氮气吹干酯化。
四、酯化
标准样品和大豆油分别用0.2ml∞单溴苯乙酮丙酮溶液(12 mg/ml)和0.2ml蓝乙胺丙酮溶液(10 mg/ml)处理。回流10 min后，用高效液相色谱法直接分析脂肪酸∞溴代苯乙酮酯混合物。
五、高效液相色谱仪分析条件
ODS柱：4.6×150mm
柱温：室温
波长：254nm
流动相：甲醇-水-高氯酸（85-14.75-0.25）为起始洗脱液。13分钟后，洗脱液变为100%甲醇，直到分离结束。
流速：2mL/min。
谱图用峰高法定量。
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