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总蛋白仪与内参的可靠性比较

2020.4.03

目前,多个主流期刊和免疫印迹专家提出了看家基因已经不适合作为内参使用了。因为大多数看家基因都是高丰度蛋白,其产生的信号大多都会接近线性动态范围的上限,当我们在检测低丰度蛋白的时候,往往蛋白的上样量会很大,易造成信号过饱和,这时候常见的内参产生的信号已经不能正确反应上样量的差异了。并且研究发现一些看家基因的表达并不是恒定的,它会随着发育阶段的不同等因素产生变化,所以使用看家基因的定量并不可靠。

此外,一些杂志直接提出了内参和目的蛋白要在同一张印迹膜上,甚至直接提出最好选用总蛋白进行归一化,如果使用看家蛋白,则需要提供看家蛋白表达稳定并且不受实验条件影响的证据。


那么总蛋白归一化到底是什么呢?又如何实现呢?

研究人员指出用总蛋白定量是一种可靠的定量方式。

总蛋白定量是以总蛋白(toal protein nomalization) 作为内参对目标蛋白表达量分析的技术。

·总蛋白比看家基因等内参的线性检测范围更宽

·在整个实验和系统中更加稳定

·能有效排除实验条件和体系对结果的影响

·更真实地反映目标蛋白表达量的变化

Azure300Q多功能分子成像系统增加了Q模块-总蛋白归一化通道,使用AzureRed做总蛋白归一化,不需要看家蛋白的一抗和二抗,节省抗体的花费,只需30min染色,步骤更简单,最后成像即可将化学发光的目的条带和总蛋白的条带在同一张膜上呈现,通过AzureSpot总蛋白分析模块进行归一化分析。


AzureRed和化学发光组合,可以同时呈现化学发光Western Blot以及全蛋白定量


AzureRed以及近红外(NIR)染料组合,可以实现全蛋白归一化多重荧光检测

AzureSpot软件全蛋白归一化分析模块


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