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实验室分析仪器--紫外可见分光光度计仪器校正方法

2022.1.24

仪器的校正,简单的说就是将仪器校准、校正、调校;它的定义为:将仪器的响应示值与其启动信号或与通过其他方法测得的真实值相联系的过程。


在规定条件下,为确定测量仪器仪表或测量系统所指示的量值,或实物量具或参考物质所代表的量值,与对应的由标准所复现的量值之间关系的一组操作。其目的是通过与标准比较确定测量装置的示值。

 

即时一台性能良好的分光光度计,在使用之前和使用一段时间之后都要对其主要性能指标进行校正,这样才能获得可靠的分析结果。分光光度计的校正主要有三个方面:

 

1)波长的校正

由于温度变化对机械部分的影响,仪器的波长通常会有略微的变化。因此需要定期对仪器进行全面校正检定,同时在每次测定前应该校正波长。校正波长可以利用仪器中的氢灯特定波长的谱线(379.79nm、486.13nm、656.28nm)或氘灯的特定波长谱线(486.02nm、656.10nm),也可以利用苯在无水乙醇中的紫外特征吸收峰(峰位为229.2nm、233.9nm、238.9nm、243.3nm、248.5nm、260.6nm、268.4nm)进行校正。

 

同时根据波长长度的不同,可以分为

短波长区校正:苯蒸气吸收光谱或苯在无水乙醇的紫外特征吸收峰

中波长区校正:氢灯或氘灯发射谱线

              常用486.13nm(F线)656.28nm(C线)

长波长区校正:镨钕玻璃的吸收光谱

1541665646(1).jpgλ(nm)

镨钕玻璃的吸收光谱

 

2)吸光度的校正

《中国药典》2015版中规定吸光度的准确度采用约60mg/L 重铬酸钾的硫酸溶液(0.005mol/L),在规定的波长处测定并计算吸收系数,得出的吸收系数再与规定的波长的吸收系数相比,应符合下表的规定(相对误差在±1%内)。

1541665420(1).png



3)吸收池的校正

用于盛放试样溶液和空白溶液的吸收池应相互匹配,即厚度和透光性应该一致,否则需要进行校正。分析测定时,应首先对配套的吸收池进行透光率一致性的核对。将吸收池进行编号作标记,装上空白溶液,然后在测量波长出处比较各吸收池的透光率,配对的吸收池的透光率相差应不超过0.5%,测吸光度,两次之差应小于 1%。否则,应将吸收池洗涤后重新装上空白溶液在进行测量,若仍不符合配对要求,将透光率最大的吸收池调节为透光率100%,即吸光度为零。测定其余各吸收池的吸光度,作为其校正值。测量样品时,以上述透光率最大的吸收池作参比池,用其他吸收池装试样溶液,测得的吸光度减去相应的校正值。


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