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分析测试百科网 > 行业资讯 > 技术原理

结合磁珠实验

2019.3.25

这一步仅为基因表达的系列分析 cDNA 合成中实验方案 A 的一部分，在实验方案 B 中，cDNA 已经结合到链霉抗生物素包被的 PCR 试管上，因此不必用磁珠结合。


实验材料

磁珠

试剂、试剂盒

Dynabead M-280链霉抗生物素

仪器、耗材

磁设备

实验步骤

实验方案 A

  1. 振荡 lmin 以使 Dynabead M-280 链霉抗生物素重新成为混悬液。

  2. 将 2X 的 100 ul Dynabeads 转移至 U—个 1.5 ml 的 Eppendorf 试管中。

  3. 用磁设备固定磁珠，移去上清液。

  4. 用 200 ul 的 IX 结合及冲洗缓冲液重悬磁珠冲洗 3 次，固定磁珠，移去冲洗液。

  5. 将 NlaIII 酶消化后的 cDNA 分成两份各 10ul，每份中加入 90ul 的重蒸水和 100ul 的 2X 结合及冲洗缓冲液；混合后加入一份冲洗过的磁珠。

  6. 混合后，在室温下 W 育 30 min(每 IOmin 混合 1 次)。

  7. 用磁设备固定磁珠，弃去上清液。

  8. 用 200ul 的 IX 结合及冲洗缓冲液冲洗固定的磁珠 3 次，然后再用 200ul 的 LoTE 冲洗 1 次。

  9. 在冲洗完最后 1 次后，固定磁珠并移去 LoTE。

  10. 继续进行第 5 步


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