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肌组织细胞培养实验——神经组织细胞培养实验

2019.4.03

实验方法原理	神经组织主要由两种神经细胞（神经元）和神经胶质细胞组成。神经元为高度分化的细胞，在组织发生晚期已失掉增殖能力，对生存条件要求高，只有在适宜情况下，如接种在胶原底层上，或在加入神经生长因子（NGF）和胶质细胞因子时，才能生存，并可能出现一定程度的分化现象，如长出突起等，但却难使之增殖；即使培养胚胎组织情况也是如此。对神经细胞的培养待深入研究。神经胶质细胞为最易培养成分，它分少突、星形和小胶质三种。神经胶质细胞与神经元有共存关系。少突产生丰富的髓磷质，助于神经元兴奋传导，成熟的少突细胞无增殖能力。星形细胞有多种功能，能调节神经元兴奋时产生的离子，提供神经元营养，并能产生促神经元发展和完成功能活动的细胞因子，在培养中有增殖能力。以上说明神经胶质细胞对神经元的存在和功能活动是十分重要的；也提示阐明神经胶质的功能活动有利于神经元的培养。
实验材料	脑组织
试剂、试剂盒	Hanks 胰蛋白酶血清
仪器、耗材	纱布培养瓶 CO2温箱
实验步骤	人脑组织可用于神经胶质细胞培养，培养组织来自手术室无菌取脑髓灰质和或白质均可用于培养。一、程序 1. 获取脑组织后，先仔细剥除脑膜和血管等纤维成分，置入Hanks液中漂洗1~2 次后，置于30~50 倍的Hanks液中；脑组织比较柔软，反复吹打即可制备成细胞悬液； 2. 为排除脂肪成分和其它碎块，把悬液注入离心管中，在室温直立5~10 分钟后，细胞或细胞团块自然下沉，脂肪等杂物易漂浮于悬液表层，吸除上清，如此反复二三次可获较多的细胞成分； 3. 向末次沉降物中加入适量营养液，通过纱网或纱布滤过，计数细胞并调整好细胞密度，接种入培养瓶或皿中，置5 %CO₂温箱中培养； 4. 细胞生长汇合后，可用0.25 %胰蛋白酶消化法做传代处理，加消化液的量以能覆盖细胞层即可，待细胞开始从瓶壁脱落（平均5~10 分钟），加入含血清培养液，吹打制成细胞悬液（以无细胞团块的单细胞悬液为佳）。二、生长特点 1. 接种后初期，细胞可能出现飘浮不贴壁现象，贴壁过程较慢。 2. 贴壁后在短期内也可能不见细胞分裂现象；细胞适应环境过程较长，然而一旦生长后，即能进入较旺盛的增殖状态。 3. 生长开始常杂有巨噬细胞、成纤维细胞和上皮细胞等，传二、三代后，这些成分即消失，逐渐形成均一的星形胶质细胞，一般形成连接不甚紧密的单层细胞。展开
其他	一、初代培养适用于研究神经元的功能活动和胶质细胞的关系等，在不传代时可培养3~6 个月。神经元能发生一定分化现象，如生长突起，但因无增殖能力，最后衰退死亡；但神经胶质尤以星形细胞能继续生存和分列增殖。二、传代培养神经胶质细胞是神经组织中比较容易培养的成分。不仅能获得生长的胶质细胞并可形成能传代的二倍体细胞系。胶质细胞在培养中生长稳定，不易自发转化，但对外界因素仍保持很好的敏感性，能用Rous病毒和SV-40等诱发转化。展开