还原糖的测定方法——斐林氏容量法
还原糖包括葡萄糖、果糖、麦芽糖,在葡萄糖分子中含有淤青的醛茎,在果糖分子中含有淤青的酮茎,在乳糖中和
麦芽糖中含有淤青的半缩羧茎,因此都有还原性。在测定还原糖时一般测定总糖时所有将糖类水解为转化糖再测定
的方法都可用来测定还原糖。
(一)斐林氏容量法
1.此法的原理、试剂、方法与总糖的测定方法相同。只是样品溶液不必以过转化,而是直接取滤液进行滴定,滤液进行滴定,滤液中的还原糖含量以在0.2-0.5%为好,又能通过增减样品量或改变稀释倍数来调节。10毫升费林氏A、B液混合时理论上相当还原糖量如下:
葡萄糖(无水)果糖或转化糖尿病 0.0500克
乳糖尿病 0.0678克
麦芽糖 0.0807克
2试剂
(1) 斐林氏A液,称69.8g cp硫酸铜于100ml水中,过滤备用
(2) 斐林氏B液,称34.6g.cp浓流锌钠和100gcp NaOH于1000ml水中,过滤备用
3方法
称取样品10-20g:制备与转化同铁氰化钾法。将样液倒入滴管中,吸取A,B液准备预滴定
预滴定:
吸A、B液各5ml→从滴管中加15ml样液→加热至沸→继续滴加样液→至兰色变潜→加3滴次甲基兰→在1分钟内滴定到终点
达到终点时,稍微过量的转化糖,将兰色的次甲基兰染色体还原为无色的隐色体,而显出氧化亚铜的红色,去碱性条件下加热糖的产物是复杂的。
去碱性中断裂是由于碱度不同,加热时间不同,生产不等的碎片,这种碎片给后面滴定带来误差,而且,这种碎片与糖没有化合量的关系,所以,Lanecrol-Eynon Method 作出数据检索表
正式滴定:
吸A,B液各5ml→于三角瓶→加比预定量少0.5-1.0ml样液→2分钟内要求沸腾1分钟→加3滴指示剂→用样液滴定兰色消失
总沸腾时间为3分钟,即滴定在3分钟完成。
计算:
还原糖=( F·V2)/(W·V1)×100
F:转还糖回数,即与10ml斐林氏试液相当的转化糖毫克数,
V1:样品试液总体积
V2:样品试液滴定量
W:样品重量
在测量乳糖制品时,若蔗糖与乳糖的含量比超过3:1时,则应与滴定量中加上相关表中(课本中表9-8)校正值后在进行计算
我们举例如下:
如果标准果糖溶液度为每100ml溶液含糖262.5mg。对于10ml斐林试液从9-5可以查得果糖液滴定应为20ml。如果不是20ml,可先算出A,B液 校正等数。然后进行计算
再如标准糖溶液浓度为每100ml溶液含糖199.3ml,对于10ml A,B液 从9-4中查到,糖液滴定量应为 25.00ml,若有出入可校正。如果要求不高,可省略校正步骤但要求1%得 测定误差,则省略校正。另外有时候并未根据检索表计算样含糖量,但对A,B液进行标定,以使确定相当得 还原糖量。这种误差为0.5%。下面我们讲标定量A,B液
准确准确称取烘干冷却得 A.R蔗糖1.5g→用水溶解称取250ml容量瓶中→定容→吸50ml于100ml 定量瓶中→加HCL5ml→再65-70摄氏度水裕15分钟→冷却→用30%NaOH中和→定容
准确吸A,B液 各5ml于三角瓶中→加水约50ml玻璃珠三粒→加热至沸→保持1分钟→加指示剂1滴→再煮1分钟→立即用糖液滴定至兰色褪去,红色出现即为终点
正式滴定,先加入比预滴定时少0.5ml左右得糖液煮沸1分钟→加指示剂1滴→再煮沸1分钟→继续滴至终点
计算: A=W*V/500×0.95
A:相当于10ml斐林氏A、B液的转化糖的量
W:称取蔗糖的质量
V :滴定蔗糖的量
500:稀释比
0.95:换算等数
最后计算:
总糖(还原糖)以转化糖计%=(A*1000/W*V)*100
A:同上
W:制取样品的量
V:滴定是时样品消耗量
1000:是稀释倍数(100/50*500)
1.预测定的目的:对样品溶液中还原糖浓度有一定要要求(0.1%左右),测定时样品溶液的消耗体积应该与标定葡萄糖标液的消耗体积相近,通过测定了解样品浓度是否合适,浓度过大或过小应该加以调整,使测定时消耗样品溶液量在10毫升左右;二是通过测定可知道此溶液的大概消耗量,以便在正式的滴定时,预先加入比实际用量少1毫升左右的样液,只留下1ml左右的样液在续滴定时加入,以便保证在1分钟内完成续滴定工作,提交预测定的准确度。
2.此实验影响测定结果的主要操作因素是反应液碱度、热源强度,煮沸时间和滴定速度一般煮沸时间短消耗糖多,反之,消耗糖液少,滴定速度过快,消耗糖量多,反之,消耗糖量少。另外溶液碱度愈高,二价铜的还原愈快,因此必须严格控制反应的体积,使反应体系碱度一致。热源一般采用800W电炉,反应液在2秒内沸腾。