提高实验室镜检能力 协力诊断隐球菌性脑膜炎
作者：赵洋洋
来源：检验地带网
近年来随着抗生素的滥用、静脉插管和体内植入人工物等操作的大量开展，器官移植及糖皮质激素等免疫抑制剂的大量使用导致的继发性免疫缺陷或免疫力低下，尤其是AIDS患者的不断增加，使得隐球菌的感染率不断升高。而隐球菌最常感染中枢神经系统，文献显示艾滋病患者隐球菌脑膜炎的发生率在5％-10％，已成为AIDS患者最常见的四个机会性感染之一，发展中国家病死率极高。故微生物实验室的脑脊液隐球菌直接镜检对于隐脑的诊断尤为重要。
笔者所在医院是上海传染病专科三甲医院，对于脑脊液隐球菌的镜检有一定经验与大家分享。
1、脑脊液的离心时间不能过短，如果菌量过少，加上离心时间过短，极易造成漏检。我们实验室常以3000转/分离心15分钟。
2、脑脊液离心之后一定要倒掉上清液再取沉淀物，有些技术人员会直接用无菌吸管吸取底部的沉淀物，其实吸取上来的沉淀物被上清液稀释了，也易造成漏检。
3、墨汁负染色并非必须使用印度墨汁，许多国产优质墨汁也可以满足镜检的要求，如珠海贝索。但日常工作中要做好此项的室内质控。
4、碰到血性或者细胞很多的脑脊液时处理方法：实验室自配5％-10％KOH溶液，KOH可破坏红细胞和白细胞，而不能破坏隐球菌菌体。笔者已做过此实验，确如如书上所说。
5、脑脊液与墨汁的比例也至关重要，有些文献说是掌握在1:0.5-0.8左右。我日常工作中是以两者混匀之后发出灰色即可，当然也与所用墨汁的浓度有关。切记：墨汁不能过多，否则菌体会被遮挡。过少时，又会染不上色造成漏检。工作中去体会方可明白。
6、正确认识隐球菌的形态至关重要，否则会造成临床的误诊。典型的隐球菌低倍镜下是呈外围有透亮折光圈的细胞，转高倍镜下，可见圆形或卵圆形出芽或不出芽的厚壁孢子，孢内含有较大的反光颗粒和许多小颗粒，孢子外周有一圈透明的厚荚膜，其厚度可与菌体相等。
7、怎么区别隐球菌和白细胞：两者在镜下极易混淆，初学者极易报错。首先，两者都可见到狭窄的透亮折光圈，但是白细胞的假荚膜边缘是模糊的，不像隐球菌的荚膜边缘是非常清晰的。其次，白细胞当中无法看到隐球菌所具有的厚壁孢子和孢内反光颗粒，这一点是极其重要的。
8、镜检时显微镜聚光器的调节：低倍镜寻找时，聚光器调到最低，保证一个较好的黑色背景，易于发现透亮折光圈的细胞。高倍镜证实时，聚光器往上调，根据视野的背景来调整。
墨汁染色操作简单，用时短，但其敏感性约在50％-80％。要在这局限的敏感率当中，给临床提供一个准确及时的报告显得特别重要。所以我们实验室人员要加强墨汁染色中每一个环节的操作，不可掉以轻心，为隐球菌性脑膜炎的诊断提供一个百分之百准确的实验室报告。
以上是我对于隐球菌镜检的一些心得体会，每家医院的性质和病人类型又大不一样，所以仅供参考。
参考文献
廖万青， 温海.临床隐球菌病学[M].北京：人民卫生出版社，2013
