脑膜炎双球菌的微生物学检查法介绍
标本
取患者脑脊液或刺破皮肤出血瘀斑取渗出物作涂片或培养。血液标本作培养。带菌者检测可取鼻咽拭子。
一、直接涂片镜检
脑脊液离心沉淀后，取沉淀物涂片，革兰染色后镜检。或消毒患者皮肤出血瘀斑处皮肤，用无菌针头挑破瘀斑取渗出物制成涂片，革兰染色后镜检。如镜下见到中性粒细胞内、外有革兰染色阴性双球菌时，即可作出初步诊断。
二、分离培养与鉴定
血液与脑脊液标本在血清肉汤培养基中增菌后，接种到巧克力色血琼脂平板上，置于含5%～10%CO2的环境中孵育。挑取可疑菌落涂片镜检，并作生化反应（表13-1）及型特异性多价血清的凝集试验鉴定。
生化鉴定
主要通过氧化酶、糖类发酵以及培养生长特点进行。
①细菌形态呈肾形；
②氧化酶试验阳性；
③触酶试验阳性；
④分解葡萄糖、麦芽糖产酸不产气；
⑤荚膜多糖抗原直接凝集试验。
三、血清凝集法
根据荚膜多糖可将脑膜炎奈瑟氏菌分为A、B、C、D、X、Y、Z、29E、W135、L、H、I、K等13个血清群，其中A、B、C群最为多见，约占90%。
关于血清凝集法用的诊断血清方面，推荐天津生物芯片公司生产的脑膜炎奈瑟氏菌全套诊断血清产品。这套产品除了包含脑膜炎奈瑟氏菌菌10个常见血清群的诊断血清。
四、核酸扩增法
流行性脑膜炎的临床诊断通常以出现发热、呕吐、头痛等临床症状为依据。进一步的确诊则需在病人脑脊液或急性衄液中分离到脑膜炎双球菌。但分离培养方法的检出阳性率较低．并且至少需要2～3 d才能确诊感染．这对疾病的及时治疗极为不利。此外，受抗生素使用及其他非特异性因素的影响．分离培养法的灵敏度不高．极大地降低了诊断结果的可靠性。因此，寻找一种快速、灵敏并且适用于I临床诊断的检测方法已显得非常莺要。近年来，因为具有特异性好、灵敏度高、检测周期短等优点，在PCR的基础上建立的基因诊断技术已广泛应用于多种病原微生物的临床检测。四川大学华西公共卫生学院联合四川省疾病预防控制中心以PCR技术为基础，结合我国流脑的流行现状，建立了Nm ABC群的快速诊断方法。
核酸扩增技术，即聚合酶链式反应（polymerase chainreaction，PCR），其基本原理是设计、合成两条寡核苷酸，作为引物，对应于待测病原微生物某一段特异性序列的两端，然后在体外模拟DNA体内复制的过程反复扩增，使靶序列放大上万倍甚至上百万倍而被检测出来。
五、快速诊断法
依据是脑膜炎患者脑脊液及血清中存在脑膜炎奈瑟菌可溶性抗原。因此可采用已知的抗体检测有无相应的抗原。
1．对流免疫电泳：此法较常规培养法敏感，特异性高。一般1小时内即可得到结果。
2．SPA协同凝集试验：将待检的患者脑脊液或血清与已知脑膜炎奈瑟菌IgG类抗体标记的产生SPA的金黄色葡萄球菌混合。若标本中存在脑膜炎奈瑟菌的可溶性抗原，则使抗体标记的金黄色葡萄球菌聚集在一起，形成肉眼可见的凝集现象。
