罗氏FFPE组织切片核酸纯化试剂盒操作说明
High Pure FFPET DNA Isolation Kit基于离心柱法的抽提原理，免去DNA沉淀和有机试剂抽提的步骤，是快速核酸抽提的理想工具。
整个抽提过程仅需3小时（含脱蜡过程）；
获得高DNA得率和质量；
在qPCR，芯片分析和测序等下游应用中获得强大信号。
| 图1：从FFPET样本中获得高得率的DNA柱形图显示了从3种不同乳腺癌或结肠癌异种移植组织的5um FFPET组织切片样品中获得的DNA平均得率。通常来说，在不同组织切片的样品个体间存在一定的DNA得率变异。图2：从样品中抽提获得高质量DNA，适用于多种下游应用。在HT29异种移植FFPET样本中抽提获得DNA，再进行100,200,300,400bp片段长度扩增子的多重PCR。泳道1和2：使用二甲苯进行脱蜡泳道3和4：使用十六烷进行脱蜡泳道5和6：多重PCR质控对照，核酸样品为人全血中抽提的完整基因组DNA图2：从近期和长期保存的FFPET样品中均可抽提获得高RNA得率 |
结果：所有泳道中均出现4个清晰的目标条带，表明High Pure FFPET DNA Isolation Kit能在FFPET样本中抽提获得高质量DNA，适用于CGH芯片分析，二代测序等对核酸模板质量要求高的下游应用。 |
| 图3：从样品中抽提获得高质量DNA，提高qPCR检测灵敏度作为qPCR实验中的核酸模板，要求高质量DNA，即良好的核酸得率、纯度和片段大小分布，并能高灵敏度和不偏倚地检测到目标基因。取5ul DNA洗脱液，分别通过LightCycler 480 Real-Time PCR Instrument扩增检测CycA（442bp）或myo（89bp）基因片段。 结果：High Pure FFPET DNA Isolation Kit抽提获得的DNA样品能在qPCR研究中获得更高的检测灵敏度（提前出线的Cq值）。 图4：将DNA应用于甲基化敏感性高分辨率熔解曲线分析（MS-HRM）等前沿应用将不同肿瘤研究样本的DNA抽提物经重亚硫酸盐处理，通过LightCycler 480 Instrument进行APC基因的MS-HRM分析，不同肿瘤组织的APC基因具有不同程度的甲基化。结果：使用High Pure FFPET DNA Isolation Kit抽提获得的DNA是MS-HRM分析的理想模板。在该研究中，共发现3中不同程度的甲基化范围：样本A的APC甲基化水平在10-100%，样本B的甲基化水平在0-1%，样本C的APC不存在甲基化。 |
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