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双转盘共聚焦技术:长时间活细胞3D动态观察和分析...-2

2021.3.08




可导出直观的hot map

 

2. 多重检测(multiplex):mirrorball可以在一个孔内同时检测阴性和阳性对照并进行多指标分析。具体方法为,用蓝色的染料如Hoechst标记阴性细胞,用绿色染料如Dio标记阳性对照细胞,将两种细胞混在一起后,在加入待测的抗体以及相应的荧光二抗。mirrorball能区分并准确定位每个孔内的绿色和蓝色细胞,同时分别统计绿色和蓝色细胞上红色荧光二抗的信号。在这个实验中,只有绿色阳性细胞上有红色抗体信号同时蓝色细胞上没有的孔才是真正的阳性孔。这个实验无论ELISA还是流式都必须做两次,mirrorball可一步完成,节省一半的试剂和试剂耗材。

多重检测protocol

 

3. 微珠检测:除了细胞水平的筛选外,mirrorball也可以采用和ELISA类似的方法,将纯化的抗原(标记biotin)包被在带SA的微珠上,同样可进行抗体的筛选。相比于ELISA,不但免洗而且所需抗原包被的用量仅为ELISA的1/10,可节省宝贵的抗原。

mirrorball可检测微珠上的散射光
 

此外,mirrorball也可以进行基于微珠的多重检测和分析,市场上可以买到不同大小的微珠或者不用颜色的微珠,在同一孔内,mirrorball可以准确定位和区分这些不同大小和颜色的微珠,并分别检测上面是否有阳性的抗体结合。

利用不同的微珠进行多重分析
 

4. 竞争结合实验:mirrorball上还可以实现免洗竞争结合实验。例如 类似于竞争性ELISA。步骤很简单,在微珠上包被二抗,然后加入固定量的荧光标记一抗和待检测的一抗,混合在一起,孵育一段时间,读板获取分析数据,并获得相应的IC50。



竞争结合实验protocol及分析结果
 

5. 全自动,整合机械臂:mirrorball可整合机械臂机和叠板架,一天可轻松完成80块384孔板的筛选通量,其中样品准备的时间小于2小时,实现真的无人值守式的抗体筛选新模式。

无人值守,高通量筛选


四、结束语


mirrorball自问世以来,以其简洁、快速和高效的抗体筛选模式,广受诺华,罗氏,Genentech,礼来,GSK,药明康德,睿智化学,恒瑞,和铂,岸迈,三生国建,华海药业等各大跨国药企、生物技术公司和CRO的青睐。mirrorball致力于用更简单的流程、更少的抗原用量、更低的人力和试剂成本、更高的通量去筛选到更好质量的抗体!
 



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