粘粒及质粒文库的铺平板和转移实验
基本方案
实验材料 | 质粒 |
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试剂、试剂盒 | LB NaOH 氯霉素 Tris·Cl NaCl |
仪器、耗材 | 硝酸纤维素滤膜 离心机 布氏漏斗 培养箱 |
实验步骤 |
1. 在含抗生素的平板上,通过系列等比稀释确定质粒和粘粒文库的滴度,计算出最佳的铺平板用的细菌悬液量并稀释到5~10 ml LB培奍基中。
2. 准备一层无菌的10 cm 或15 cm的Whatman 3 MM 滤纸,故在玻璃布氏漏斗或瓷质过滤漏斗中,加入10~20 ml LB培养基。
4. 慢慢抽吸液体,待菌悬液被吸干之后,揭下滤膜并移至含抗生素的平板中,置于37℃培养,直至长出直径达1~2 mm 的菌落。
8. 在硝酸纤维素膜上覆盖3张20 cm×20 cm 的3 MM 滤纸,并同样大小的玻璃平板压在其上,转印克隆。
9. 移去压在滤膜上的玻璃平板和滤纸,用20-G针头在重叠的原滤膜和转印膜上刺一小孔以标记方向。
13. 接着,滤膜转印面朝上,依次放在3张分别饱蘸下面3种液体的46 cm×75 cm 3MM Whatman滤纸上5 min。
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