细菌内毒素的提取
内毒素即革兰阴性菌细胞壁中的脂多糖(LPS),存在于细菌的细胞外膜,当细菌死亡后,细胞膜破裂就释放出来,由核心多糖、侧翼多糖及脂A组成,体积微小,其粒径约在1~ 5毫微米(Nanotex nm,为千分之一微米1×10－3m m),一般认为其分子量在1000以上.具有水溶性、不挥发性、不带有正电性和负电性等特征.其耐热性,一般在60℃加热1小时无影响,100℃不裂解,120℃加热四小时能破坏98％,180－200℃干热2小时或250℃加热半小时才能完全破坏.
内毒素生物学活性多种多样,在体内作用错综复杂,参与了机体许多病理生理反应过程.内毒素可以诱发机体炎症因子的过度释放,导致系统性炎症反应综合症、多器官衰竭,死亡率很高,占死因的50－70%.
推荐1曾经试过从大肠杆菌中提取粗制内毒素,用的方法是反复加热、冻存法,但是效果不是理想.具体方法是将大肠杆菌在2个大气压下(因具体条件限制,我只是在1.2个气压左右),蒸汽灭菌30min,后－20度冻存24小时,反复3次,即可.推荐2,目前,市面上有卖从转染后的质粒DNA溶液中提取内毒素的试剂盒(因为,转染后质粒DNA溶液若含有内毒素,可能导致转染的失败),其也可以从细菌死亡裂解后的溶液中提取内毒素.
推荐3,传统的内毒素提取方法就是加热菌液或用其它方法使细菌裂解,然后用特殊石棉滤板过滤即可.
推荐,纯化重组蛋白的时候经常需要去除内毒素,当然同样的操作也可以提取内毒素.
推荐4,如果做正规的内毒素实验可以购买LPS O111:4或O55:5.
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