融合蛋白化学降解实验
基本方案 用溴化氰
实验方法原理 | |
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实验材料 | 1 mg ml 融合蛋白 |
试剂、试剂盒 | 50 mg ml CNBr 70%(V V)甲酸 1 × SDS 样品缓冲液 |
实验步骤 |
1. 进行预试验以确定最短温育反应时间。冻干两小份各 50 μl 的融合蛋白溶液,将其中一份重悬于 50 μl 50 mg/ml CNBr / 70% 甲酸中,另一份重悬于 50 μl 不含 CNBr 的 70% 甲酸中,室温下反应。 2. 在 0、8、24 及 48 h 的时刻,各取 5 μl 并冻干。 3. 往所有冻干样本加 20 μl 1 × SDS 样品缓冲液,煮沸 10 min,加样于 SDS-聚丙烯酰胺凝胶。 4. 分析凝胶电泳结果以确定完全裂解蛋白质所需的最短温育反应时间。
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注意事项 |
1. CNBr 有剧毒,须在通风橱中操作,使用及弃置均应小心谨慎。 2. 当蛋白质对 CNBr 的裂解有抗性时或当待裂解的为不溶性融合蛋白时,可在反应中加入盐酸胍至终浓度为 6 mol/L。 |
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