尿液干化学分析原理及其临床意义（二）
五、潜血（BLD）
[反应原理]：尿液潜血分析试纸的反应原理是利用血红蛋白中的亚铁血红素的假过氧化物酶活性催化分解过氧化物，产生新生态的氧，氧化指示剂，使指示剂显色，从显色的强度可以得知尿液中血的浓度。
[临床意义]：
1. 尿液中混有0.1%以上的血液时，便呈肉眼血尿的特征，血量在此以下便只能用潜血反应或尿沉渣镜检才能证明。血尿常见于尿路炎症（急性肾炎、肾结核、尿道炎等）、结核、肿瘤,有白细胞时则表示有炎症；蛋白阳性、尿沉渣中有肾上皮细胞、管型等时，应考虑肾炎；特别是有红细胞管型时，是肾实质出血的佐证。
2. 血红蛋白尿见于发作性血红蛋白尿症，还见于各种中毒、感染、链球菌败血症、疟疾（黑水热）、灼伤、溶血性输血反应等情况。
[注意事项]：
1. 成年女性的经血常可引起测试结果出现假阳性，因此应采取必要的采尿措施以减少污染。
2. 分析试纸不仅可以测试红细胞，还能测试血红蛋白，因此，当血红蛋白破裂时，可引起试纸测试结果与镜检结果的不一致，应加以区别。
3. 尿液中含有对热不稳定酶、肌红蛋白或菌尿，可引起假阳性；尿液中含有大量维生素C时，可以抑制后一步反应的进行，使测试结果偏低甚至出现假阴性，因此，测试时应使用具有抗维生素C干扰能力的分析试纸。
六、酸碱度（pH）
[反应原理]：pH试纸的应用是非常广泛的，pH的反应原理是基于pH指示剂法，目前，一般的尿液pH分析试纸中含有甲基红[pH4.2(红)～6.2(黄)]，溴甲酚绿[pH3.6（黄）～5.4（绿）]溴百里香酚蓝[pH6.7(黄)～7.5(蓝)]，这些混合的酸碱指示剂适量配合可以反映尿液pH4.5～9.0的变异范围。
[临床意义]：
正常尿液呈弱酸性，约为6.0，因食物的不同，pH的变化范围为4.5～8.0。pH测定结果的判断比其他实验结果的判断要难一些，因为尿液pH的波动幅度大而快，而正常尿和病人的尿的pH没有明显的差别，所以pH单独使用的意义不大。但与其他临床资料配合起来分析，则可成为重要的资料。
[注意事项]：
1. 检测时尿标本必须新鲜，放置过久细菌分解尿液成分可导致尿液pH改变。大多数情况下，细菌分解尿素产生氨，使尿液呈碱性；少数情况下，细菌也分解尿液成分产生酸性物质，使尿液pH偏酸。
2. 当肾脏分泌的尿液含有过多的碳酸氢盐和碳酸缓冲对时，放置时间过长，使尿液中的二氧化碳自然扩散到空气中，使尿液pH增高。
3. 在测定过程中，应严格按照规定的时间将试剂带浸泡尿液标本中，浸泡时间过长，尿pH呈减低趋势。
七、蛋白质(PRO)
[反应原理]：蛋白误差法，某种特定的pH指示剂阴离子受蛋白质阳离子吸引，进一步电离，使指示剂的变色点发生改变，这种方法称为蛋白误差法。尿试纸中含有四溴酚蓝（TBPH)指示剂和pH为3的缓冲体系，TBPH的变色点在pH3～4之间，它在尿中解离成阴离子，与蛋白质阳离子结合后呈黄色。
[临床意义]：检验尿液蛋白是临床尿液常规化学检查之一，尿液蛋白试制主要检测的是尿液中的白蛋白。正常情况下，健康成人每日排出的蛋白质含量极少（约为30～120mg），一般的常规定性方法都不能检测出来。一旦尿液蛋白含量>100mg/L或>150mg/24h尿，尿液蛋白质定性实验便呈阳性反应而称为蛋白尿。蛋白尿主要反映肾小球（管）损害及肾小球滤过率的增加。
[注意事项]：
1. 尿液标本必须新鲜，变质的尿液会使尿液的pH值产生变化。尿液本身过酸会出现假阴性、过碱会出现假阳性，缓冲体系适合检测的pH范围为3～7.5。例如含有奎宁、奎宁丁和嘧啶等药物时，尿液呈碱性（pH>8.0），超过了试纸本身的缓冲能力，可能出现假阳性结果。
2. 尿液分析试纸中的TBPH对于白蛋白的敏感性远远超过其他蛋白，因此，在尿液中仅含有其他种类的蛋白时，该方法的测试结果可能为阴性。
3. 试纸条不能长时间浸泡于尿液中，否则由于试剂溶于尿液中导致失效而出现假阴性。
4. 多种物质（大多为药物）对尿蛋白的测定结果都有影响，如青霉素可以使测试结果偏低甚至出现假阴性；季胺盐、PVP（聚乙烯吡咯烷酮）、喹啉等可使试纸出现假阳性；某些洗涤液污染尿液时，测试结果会偏低。另外，大量饮水会稀释尿液，可能造成漏检。
八、亚硝酸盐（NIT)
[反应原理]：尿液中的亚硝酸盐与试纸块中的对氨基苯砷酸或磺胺发生重氮化反应，生成重氮盐，生成的重氮盐再与试纸上的N-1-萘基乙二胺盐酸盐或四氢苯并喹啉-3-酚偶合生成红色的偶氮化合物（盖氏试剂法）。
[临床意义]：正常情况下，尿液亚硝酸盐的定性实验一般为阴性。当泌尿系统受到感染时，由于细菌还原硝酸盐生成亚硝酸盐，因此检测结果为阳性，常见于大肠埃希氏菌引起的泌尿系统感染。尿液亚硝酸盐检测结果为阳性时，预示着尿液中的细菌数量在10万/ml以上。
[注意事项]：
1. 当尿液中缺少硝酸盐时，即使有细菌感染也会出现阴性结果；尿液在体内的留存时间太短会因为硝酸盐来不及还原而得到阴性结果。
2. 留取标本的样杯必须清洁，并及时送检，以免存放时间过长使细菌生长而出现假阳性结果。
3. 使用利尿剂后，尿中的亚硝酸盐含量降低，可能出现假阴性；硝基呋喃可降低反应的灵敏度；非那吡啶可引起假阳性；使用抗生素后，细菌被抑制可出现假阴性；尿液中含有大量维生素C时，也可能出现假阴性。
4. 高比重尿可降低测试反应的灵敏度，尿中的亚硝酸盐离子小于1.0mg/l时，可能出现假阴性结果。
九、白细胞(LEC)
[反应原理]：利用中性粒细胞内酯酶催化水解试纸中的吲哚酚酯，产生游离酚，游离酚氧化偶合或与试纸中的重氮盐偶合而显色。
[临床意义]：在各种尿路炎症情况下，尿液中都可能出现白细胞。白细胞的干化学检查可以和别的检查项目一起对尿液进行过筛检查。
[注意事项]：
1. 分析试纸只与粒细胞浆内的酯酶起作用，因此分析试纸只能测定粒细胞，不能测定淋巴细胞，在肾移植病人发生排异反应时，尿中以淋巴细胞为主时，会得到假阴性结果，应参考其他检测方法如显微镜检查，以做出正确的判断。另外，白细胞破裂后，酯酶释放到尿液中，干化学的检测结果还能是阳性，而镜检则为阴性。
2. 尿液被甲醛污染，或含有高浓度胆红素，或使用某些药物时可出现假阳性；尿蛋白>5g/L，或尿液中含有大剂量先锋IV；庆大霉素等药物时，可使结果偏低或出现假阴性。
3. 尿液未混匀，尿分析仪的载物台上有污染物等情况都会使结果产生偏差。
十、维生素C（VC)
[反应原理]：利用VC的还原性，使氧化态的2,6-二氯酚靛酚变成还原态的2,6-二氯二对酚胺，使试纸颜色由粉红色变成无色，颜色变化的强弱与尿中VC的浓度相关。
[临床意义]：
1. 检测尿液中维生素的含量可以测试人体的营养状况，口服维生素C 500mg后，尿维生素C排泄量在15～57μmol（3～10mg）每4h内为正常；大于57μmol（10mg）每4h为充裕；小于17μmol（3mg）每4h为不足。
2. 尿液维生素C降低，常见于维生素C摄入量不足或坏血病。
3. 尿液维生素C长期增高可能与肾结石形成有关。
4. 在尿液分析试纸中，VC试纸还可以判断尿液中的VC对其他试纸的影响程度。
[注意事项]：
1. 分析试纸只能测定还原性的维生素C，可能与其他检测方法的测试结果不同。
2. 在pH>4.0时，尿液中的酚和巯基化合物等内源性物质可干扰测试，使测试结果偏高；另外半胱氨酸、硫代硫酸钠也干扰测试，使测试结果偏高。
3. 当尿液中含有氧化性物质时，可氧化维生素C，使测试结果偏低。
4. 维生素C在碱性尿中极不稳定，容易分解，因此尿标本应及时检测。
