显微镜基本知识(二)
一、显微镜接物镜头上的标志
1、镜头种类和放大倍数
Splan10xSplan40xSplan100x(平场消色差)
2、 镜口率(数值孔径) N.A表示
N.A0.25(低) N.A0.65(高) N.A1.25~1.40(油)
3、镜筒长度(mm)
160/—160/0.17，160/0.17(盖片厚度)
4、色条标记:白100;蓝40;绿20;黄10
二、显微镜的精度
1、齐焦精度：镜头转换应该在一个平面上;
2、 定位精度：镜头转换应该在一个视野中;使用不当破坏精度
3、合轴调节：目镜、物镜、聚光器应该在一个光轴上，缩小聚光器光环到最小，旋转聚光器螺丝，调节到正中。
3个数据使用不当都影响观察质量，效果受到影响。所以观察不清楚，拍照照片效果不佳与精度合轴不当有关。
三、 镜口角
镜口角：接物镜镜头接触，从标本射过来的光线，伸展到接物镜下组透镜边缘所张的角。
以“α”表示。10×N.A :0.25=30°
40×N.A:O.65=80°
100N.A:1.25=110 °
四、镜口率(数值孔径)
镜口率是指光线从聚光器经过盖片，所引起折射后所形成光锥底面积的孔径数值，又称数值孔径，通常以N.A 表示，刻在接物镜和聚光器的外侧。
1.它是判断接物镜和聚光器的重要依据，是判断显微镜优良的标准。
2.显微镜质量标准决定镜口率高低，不决定放大倍率大小。
五、镜口率的定义
镜口率是镜口角半数的正弦和媒介质曲折率两者的乘积。公式：
N.A== n . Sinα/2
n ：介质折射率(空气1;水1.33;油1.515)
α：镜口角
六、利用介质提高镜口率
设镜口角 90°
空气: 1× Sin1/2 =0.707
水侵 : 1.33 × 0.77==0.94
油 侵：1.515 × 0.707==1.071
改变介质藉以提高分辨率(两点之间最大距离)，决定观察物体的精度与效果，研究者力求改变介质，提高精度。
七、增加镜口角为110度
设镜口角 110°
空气: 1× Sin1/2=0.707
空气：N.A==1×0.8251 ≈0.83微米(物体大小)
水浸：N.A== 1.333×0.8251==1.11微米
油浸：N.A==1.515 ×0.8251==1.25微米
要提高分辨率必须： 1.增加镜口角;2.增大介质折射率。
八、普通光学显微镜分辨率极限
α <180. Sinα/2<1
干燥系物镜镜口率<1，在0.04~0.95之间
油浸物镜镜口率提高0.83~1.25
目前油镜镜口率为1.40;显然可以提高分辨率
九、显微镜的分辨率
分辨率，鉴别力，分辨本领;
分辨率：显微镜分辨被检物体的细微结构的能力。它与“分辨距离”成反比，分辨的距离越小，显微镜的分辨率越高。
分辨率(R )公式：R=λ/2 N.A=波长/2镜口率
十、光波的波长
十一、分辨率计算、分辨率计算
低倍N.A =0.28; 高倍=0.65;油浸=1.25
波长0.55(黄色全波长)
R=0.55/2×0.28=0.55/0.56=1μ(物体大小)
R=0.55 /2×0.65=0.55/1.3=0.42μ
R=0.55/2×1.25=0.55/2.5=0.22μ
如果R=0.55/2×1.40= 0.55/2.8=0.19μ
镜口率越大，分辨率越高，物镜的价值越优。
十二、如何提高显微镜分辨率1
1、提高镜口率;
波长0.55;N.A1.4，则R=0.55/2×1.4=0.2微米
普通显微镜的分辨率极限 0.2微米
2.缩短波长紫外线光，则R=0.27/2×1.4=0.1微米
可提高分辨率一倍(荧光显微镜)
采用更短X，γ射线，电镜电子流波长0.0387A
十三、如何提高显微镜分辨率2
3、改变显微镜的射入方式，以直射改为斜射，暗地映光显微镜，提高分辨率一倍，观察活体。
4、改短波的结构，波峰升高;降低波谷，使用1/2波峰或波谷，从而提高分辨率，如相差显微镜。1952年获、诺贝尔奖。分辨率0.1微米(活体，正负相差)
5、采用1/4波长提高分辨率，如微分干涉显微镜
十七、暗视野显微镜介绍
普通显微镜其照明光线从标本下方经过聚光器汇聚后透过标本，进入物镜，它适用于观察对光可透的标本。若利用斜射光照射物体，使直射光线不能直接进人物镜，只有标本经斜射照明后发出的反射光可进入物镜，这样在显微镜下可见到暗视野中明亮的物像。利用暗视野显微镜可以观察到标本的细微部分，如细菌鞭毛的运动和梅毒螺旋体、奋森氏螺旋体。
聚光器的区别：暗视野显微镜和一般的明视野显微镜区别只在于二者的聚光器不同，暗视野聚光器可阻止光线直接照射标本，使光线斜射在标本上。常用的暗视野聚光器有抛物面聚光器、心形聚光器和同心球面聚光器。
调焦范围:载物台垂直运动由滚柱(齿条—小齿轮)机构导向，采用粗微同轴旋钮，
粗调行程每一圈为36.8mm，总行程为25mm，微调行程为每圈0.2mm，。有的显微镜具备粗调限位器和张力调整环
结语：我是以“弯背为桥，站立为梯，桥之为道，梯之望理”告诉我整理资料。
每人的手机或是计算机，日常使用中能够发挥最大效能，最多30%就不错了，能够使用就心满意足了，不去深入最佳。而显微镜就不同了，我们要发挥最大效能，探索微观世界的奥秘，要在复杂的条件下，区别细微结构，就不能不要求把仪器调整到最佳效能，取得最好效果，即使非常好的显微镜调节精度不够，拍照的结果却不尽人意，其原因是基础知识与技术水平的提高。
