原生质等电点测定实验
实验方法原理 | 原生质的主要组成物质──蛋白质为两性化合物,它在不同pH的介质中,其解离情况不同: (1)在酸性介质中: (2)在碱性介质中: 当介质的pH值愈小时,此物质的解离就趋向于(1)式,反之则趋向于(2)式,若在某一pH值下,此物质的解离程度达到平衡,这些外界介质的pH即为此物的等电点。 不同的植物组织,由于它们原生质不尽相同,所以具有不同的等电点。欲测植物细胞或组织的等电点,可采用染色法进行。 一般采用酸碱性不同的染料作为指示剂,常用的酸性染料有苯胺红、曙红等,这些染料的有色部分为阴离子;碱性染料有亚甲兰,靛兰等,亚甲兰(Methylene blue)分子式为: 它的有色部分为阳离子。 将待测的植物组织放入苯胺红和亚甲兰的混合溶液中,当介质的pH值低于组织的等电点时,带正电荷的原生质便吸附酸性染料的有色部分而显玫瑰红色;当介质的pH值高于组织的等电点时,带负电荷的原生质便吸附碱性染料的有色部分而呈兰色;当介质的pH值与组织的等电点相等时,原生质的着色反应为红与兰的混合色──紫色。 植物组织的等电点并不固定在一个数值上,而是具有一定范围,常把这个范围称为植物组织的“等电区”。本实验则是根据上述原理测定植物组织的等电点。 |
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试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 一、材料与设备 |
其他 | 本实验中的酸性染料亦可采用曙红,若用曙红进行染色时,不必配制不同pH值的缓冲液的混合染料,可直接取染色液(浓度有0.01 M )等量混合,进行染色20-30分钟,然后将切片取出分别浸入相应pH的缓冲液内浸泡,半小时后,便可以取出切片鉴别组织的等电区。 |
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