噬菌体抗体库技术知识点
将体外克隆的抗体基因片段插入噬菌体载体,转染工程细菌进行表达,然后用抗原筛选即可获得特异的单克隆噬菌体抗体。利用这一技术可以得到完全人源性的抗体,在HIV等病毒感染和肿瘤的诊断与治疗方面有其独特的优越性。
(一)基本原理和程序
构建噬菌体抗体库通常包括以下几个过程:
1.构建噬菌体载体;
2.表达载体转化细菌,构建全套抗体库;
3.从外周血或脾、淋巴结等组织中分离B淋巴细胞,提取mRNA并反转录为cDNA;
4.应用抗体轻链和重链引物,根据建库的需要通过PCR技术扩增不同的Ig基因片段。
(二)噬菌体抗体库技术的特点
1.模拟天然全套抗体库;
2.可获得高亲合力的人源化抗体;
3.避免使用人工免疫和杂交瘤技术。
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