乙型肝炎表面抗原定性检测（HBsAg）操作规程

2019.4.20

1.检验目的

检测HBsAg主要是用于乙型肝炎的的诊断、招工体检、征兵体检、幼儿入学、献血员筛选、血液制品的复检、了解乙肝病毒感染者的感染状况、疗效观察及预后评估，另外还用于乙型肝炎的流行病学调查。

2.方法原理

采用ELISA双抗体夹心法，即酶联免疫吸附法，包被HBsAb于琼脂微孔与标本中的HBsAg形成Ab-Ag复合物，再于酶标HBs抗体结合，加入TMB底物产生显色反应。

3.性能指标

此方法快速简便、特异性强、检测灵敏度度0.5ng/ml.

4.标本收集

4.1标本类型：静脉血或动脉血的血清或血浆标本均可作为检测标本（抗凝剂可用肝素钠、枸橼酸钠、ACD、CPDA-1或EDTA,抗凝剂的质量应符合化试药品要求--化学纯或分析纯，使用的比例以厂家推荐为准）;其他体液如尿液、唾液、精液、羊水、胸水、腹水、乳汁等体液可以作为检测标本，但加热灭活的血清和血库的库存血则不宜作为检测标本。

4.2标本留取：以空腹为宜，收到标本后最好立即离心留取血清或血浆（凝固血应待其充分凝固后收集血清）,不能有残留的红细胞、纤维蛋白丝，使用肝素治疗的病人宜在肝素治疗前抽血。

4.3标本保存：留取的标本最好在3小时内检测，不能立即检测的应放置于2-8℃最长达14天（可以含有凝块但要密闭以防蒸发）,或者-10℃最长达14天（不能反复冻融也不能含有凝块和红细胞）.

4.4标本容器：盛放标本的容器必须为洁净的一次性真空采血管、玻璃试管、一次性的不同规格的塑料离心管

4.5标本外送：如涉及到需要外送的标本，必须以规定的容器（0.5ml塑料离心管）存放并密封，并根据邮寄规则和要求进行包装，运送时还要放入冰袋（2-8℃）或干冰（-10℃）由专人运送至指定地点指定接收人。

4.6拒收标本：凡与4.1-4.5所述内容不符的标本，检验人员应向临床或就诊者说明拒收标本的原因，并提出解决的方案或建议。

5.分析系统

5.1分析仪器：为美国BIO-RAD公司提供的MODEL550型酶标仪，仪器校准请参见仪器操作规程。

5.2分析试剂：为上海科华公司提供的配套的HBsAg试剂盒，规格为96test/盒，2-8℃贮存，有效期12个月；在效期内使用试剂。

5.3质控试剂：为上海公司提供的配套的HBsAg试剂盒中所附带的阴、阳性对照，2-8℃贮存，有效期12个月每月一次质控小结，失控要有记录及纠正的结果。

6.操作方法

6.1每孔加入待测标本50微升。

6.2每孔加入酶结合物1滴，充分混匀，封板，置37℃孵育30分钟。