技术强则药物强—单个B细胞抗体制备技术（一）
如今,单克隆抗体药物以其独特的作用机制及高效性,在肿瘤和自身免疫疾病的治疗中发挥了不可估量的作用,成为全球的研发热点，目前已有2400个单克隆抗体药物处于研发及商业化阶段。
1975年杂交瘤技术问世[1]。1986年鼠源单克隆抗体药物Muromonab的上市拉开了单克隆抗体发展的序幕。随后的50年，单克隆抗体药物经历了嵌合抗体-人源化抗体--全人源抗体四个阶段，产生了抗体偶联药物、抗体融合蛋白、单域抗体等多种新型抗体药物，标志着免疫疗法黄金时代的开启[2]。单克隆抗体药物的推陈出新归根于单克隆抗体技术的不断发展与创新。目前应用的抗体技术有：杂交瘤技术、噬菌体展示技术、天然全人源库技术和单个B细胞技术。
单个B细胞抗体制备技术原理
单个B细胞技术[3]是近年来新发展的一类快速制备单克隆抗体的技术，是根据每一个B细胞只含有一个功能性重链可变区DNA序列和一个轻链可变区DNA序列，以及每一个B细胞只产生一种特异性抗体的特性，从免疫动物组织或外周血中分离抗原特异性B细胞，通过单细胞PCR技术从单个抗体分泌B细胞中扩增IgG重链和轻链可变区基因，然后在哺乳动物细胞内表达获得具有生物活性的单克隆抗体。这种方法保留了重链和轻链可变区的天然配对，具有基因多样性好、效率高、全天然源性的特点，也成为了目前快速开发针对抗病毒感染性疾病抗体的重要策略。
单个B细胞抗体制备过程
图1 单个B淋巴细胞抗体制备过程[4]
1. 鉴定和分离单个B细胞
1）溶血斑块技术分选B细胞
溶血斑块技术原理[5]是抗原与抗体反应后，在补体作用下能使红细胞裂解形成溶血斑块，进而通过显微技术筛选和分离抗原特异性B细胞。该方法有点：方便、快捷、特异性好；缺点：红细胞容易受到温度、渗透压、酶等多方面影响，且溶血斑块技术分离的B细胞往往不能进行高通量分析和活细胞增殖。
图2 克隆单细胞免疫球蛋白VH和VLcDNAs产生特异性抗体的策略[5]
2）MACS法（磁珠分选法)分选B细胞
原理是基于抗原抗体结合的特异性，B细胞表面分子与包被有特异性抗体的磁珠相结合，形成表面分子-抗体-磁珠复合物，在外加磁场中，通过抗体与磁珠相连的细胞被吸附而滞留在磁场中，不能与特异性抗体相结合的细胞由于没有吸附磁珠，不在磁场中停留，从而使细胞得以分离[6]。该方法优点：操作简单、稳定、重复性好；缺点：用到的抗体种类较多、对磁珠与磁珠柱的质量要求较高、费用较高。该方法可以和其它分离方法配合使用。
图3 磁珠分选法原理图[6]
