磷酸钙介导的真核细胞转染实验
磷酸钙法
高效转染法
| 实验材料 | 真核细胞 |
|---|---|
| 试剂、试剂盒 | CaCl2 HEPES缓冲液 氯化铯 PBS |
| 仪器、耗材 | 培养箱 锥形管 离心管 |
| 实验步骤 |
1. 在转染前一天将细胞分入10 cm 组织培养平板中。当被转染的细胞是贴壁细胞，倍增时间为18~24 h时，一般按1：15从长满的培养皿中分细胞效果较好，转染的当天，细胞应在培养皿中很好地分散分布。在加入沉淀前2~4 h，用9 ml 完全培养液培养细胞。
2. 将要转染的DNA用乙醇沉淀，空气中晾干沉淀。将DNA沉淀重悬于450 μl 无菌水中，加50 μl 2.5 mol/l CaCl2。
3. 加500 μl 2×HeBS于一无菌的15 ml 锥形管中，将机械式移液器安上1 ml 吸头， 一边吹打2XHeBS，一边用巴斯德吸管逐滴加入DNA/CaCl2溶液，随即在漩涡混合器上振荡5 s，将其在室温下静置20 min 以形成沉淀。
5. 在标准生长条件下培养细胞4~16 h，除去培养液，用5 ml 1×PBS洗细胞2次，加 10 ml 完全培养液培养细胞。
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