限制性内切酶酶切反应实验原理
限制性内切酶已有百余种，每种酶有其特定的核苷酸序列识别特异性，酶的活性需Mg2+来激活。不同的酶也有许多差别：有些酶除需Mg2+外，还需ATP等其他辅助因子的激活；切割位点和识别序列间的距离不同；某些内切酶同时具有甲基化作用。根据这些差别，可将限制性内切酶分为Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型。Ⅱ型限制性内切酶只需要Mg2+来激活，酶在其识别序列内切割双链DNA，产生的各种DNA片段具有相同的末端结构，而且大多数的Ⅱ型酶可提供粘性未端，有利于片段再连接，大部分Ⅱ型酶所识别的序列具有反向对称结构（回文结构）。
限制性内切酶对环状质粒DNA产生的酶切片段数与切口数一致，因而酶切后的片段在电泳凝胶中的区带数，就是切口的数目。用DNA Marker作为对照，通过电泳迁移率的比较，可以粗略地测出分子形状相同的未知DNA的相对分子大小。
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