微生物实验纸片法测定测定抗生素效价方法的实验步骤
实验前准备：4个培养皿,2支移液管,1支涂布棒,并将培养皿包好灭菌,取一定的蒸馏水灭菌制成无菌水.
1、配制营养琼脂培养基：称取营养琼脂9.6g,加入300ml蒸馏水,加热煮沸后将培养基导入锥形瓶,然后包扎灭菌(121°C,20min).
2、倒平板：在无菌环境操作下,将上述培养基倒入4个平板,并编号1,2,3,4.
3、制菌悬液：用5ml无菌移液管在无菌操作下,吸取3ml无菌水到菌种斜面,用接种环轻刮下菌苔,捣碎,塞上棉塞,振荡片刻.
4、将抗生素稀释成10-3,10-4,10-5,10-6四种不同稀释度的梯度液.
5、取直径1cm圆形滤纸若干,取4个圆形滤纸分别放入10-3,10-4,10-5,10-6的抗生素溶液中浸泡一会.
6、待平板凝固后接种,各取0.2ml菌悬液倒入平板中,用涂布棒抹匀.
7、在1,2,3,4,号已接种的平板中分别放入4个浸泡在10-3,10-4,10-5,10-6抗生素溶液中的滤纸片,并注意个纸片间的距离应较大.
8、培养,放入37°c恒温箱中培养24h.
9、观察测量并记录数据,观察抗生素滤纸周围的透明抑菌圈,测量16个抑菌圈的大小,求算不同浓度抗生素滤纸抑菌圈的大小.
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