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葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性测定

2021.6.09

【测定原理】
基本原理同葡萄糖‐6‐磷酸脱氢酶荧光斑点试验,不同的是用紫外分光光度法定量测定酶活性。即每隔1分钟在340nm 波长测定孵育液中NADPH 吸光度(共测6次),求出每分钟吸光度增加的平均值,根据单位时间内NADPH 生成的量来计算G6PD 活性。葡萄糖‐6‐磷酸脱氢酶活性定量测定由于所用试剂及体系的不同,方法有多种:①WHO 推荐的Zinkham 法;②I CSH 推荐的Glock 与McLoan 法;③NBT 定量法;④Chap man 和Dern﹒法等。临床常用前三种方法。

【标本要求】
用EDTA(每管含20μl 1.0mg/ml EDT A)或肝素(含0.02ml 的1g/L 肝素烘干的试管)抗凝血2ml 均可。若在4℃保存,可以稳定一周,但最好是在48 小时内测定完毕。

【结果报告】
单位定义:根据每升血液每分钟催化反应1μmol 的NADPH 为1 个国际单位(I U),换算成每克血红蛋白的G6PD 酶活性。

【参考范围】
正常人G6PD 活性为:① WHO 推荐的Zinkham 法:(12.01 ±2.09)I U/gHb(37℃);②I CSH 推荐的Glock 与McLoan 法:(8.34 ±1.59)I U/g Hb(37℃);③NBT 定量法:(13.1~30.0)NBT 单位;④Chap man 和Dern﹒法:(2.8~7.31)I U/g Hb(25℃)。

【临床意义】
G6PD 活性下降见于G6PD 缺陷症患者。一般来说,患者测定值较正常平均值降低40%以上即可做出诊断。

【方法学评价】
本方法能准确地测定患者G6PD 活性,是一种确诊试验,在临床上也较容易开展,所以临床上该试验是确诊G6PD 缺陷症的最主要实验室测定手段。若在急性溶血期,如果G6PD 活性测定结果正常而又高度怀疑为G6PD 缺陷症,应采取下列措施用以确定是否存在G6PD 活性下降:①急性溶血后2~3 个月复查G6PD 酶活性;②低渗处理红细胞,测定处理后溶血的G6PD 活性;③将全血高速离心沉淀后,取底层红细胞测定其G6PD 活性。如果G6PD 活性明显降低,则诊断为G6PD 缺陷症。如果在溶血发作期输注了红细胞,会使G6PD 活性的水平升高;新生儿或高网织红细胞的标本,也会高些,所以要考虑到各方面因素对活性的影响。由于影响因素较多,所以最好同时作阴性对照和阳性对照。

参考文献: 
1 王霄霞 俞 康.血液系统疾病的检验诊断.第1版.北京.人民卫生出版社,2007年01月


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