卵白蛋白的测定
鉴于在常温条件下, N-卵白蛋白仍然会自发地向S-卵白蛋白转变, 且转变不可逆[11], 因此如何快速地检测S-卵白蛋白是亟待解决的问题。
对S-卵白蛋白含量的测定通常采用蛋清 (或蛋白溶液) 稀释后水浴加热的方法[6]:移取部分蛋清稀释液于1 支密闭试管中, 试管水浴加热一段时间后冷却。然后加入沉淀剂, 搅拌均匀后, 倾注进离心管；此外, 用相同量的沉淀剂冲洗试管, 减少液体的损失。混合离心管内容物, 静置一段时间, 高速离心几分钟, 移取部分上清液, 与双倍的双缩脲溶液混合。室温下静置一段时间, 测定540 nm处的吸光度。对照样为与上清液移取量相同去离子水与双倍的双缩脲溶液混合液。
还有运用蛋清 (或蛋白溶液) 稀释后水浴加热测定S-卵白蛋白的方法。由于卵白蛋白和S-卵白蛋白在热稳定性质上的明显差异, 天然卵白蛋白加热变性形成沉淀, 而热稳定明显优于天然卵白蛋白的S-卵白蛋白则具有一定的耐热性, 在同等温度中保持原状, 存留在上清液中, 在上清液中加入双缩脲溶液, 根据吸光度计算S-卵白蛋白含量。双缩脲法的实质是与蛋白质中氨基酸残基间的肽键反应, 因此一些短肽链也会显示一定吸光度。
针对一些弊端, 采用分子印迹技术对上清液中的S-卵白蛋白进行特定的分子识别以测定其含量, 分子印迹技术在小分子的识别中应用比较广泛, 已有学者研究蛋清中白蛋白的分子印迹。分子印迹聚合物根据模板分子制作, 可专一识别目标分子, 具有分辨能力高、稳定性好、使用寿命长等特点。
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