单核细胞增生李斯特氏菌的分子生物学检测方法
随着核酸探针杂交技术的应用，使对单核细胞增生性李斯特氏菌的检测进入了分子水平。
1、探针检测技术
这一技术是最早应用于李斯特氏菌检测的分子生物学技术。早在1988年，Atin 等就克隆出李斯特氏菌β溶血素基因的一个500bp DNA 片断并测序，以此序列合成4种寡核苷酸探针，以32P 标记该探针，经斑点杂交实验证实，该探针只与李斯特氏菌反应，与其他种的李斯特氏菌和属外的细菌均呈阴性，表现出很好的特异性。但探针杂交无法分辨死菌和活菌，尽管通过增菌可使死菌比例减少，相对地减少假阳性，但并不能完全杜绝假阳性结果。随着探针技术的逐渐成熟，人们开始关注将多个DNA 特异性探针固定到芯片上，制成基因芯片。基因芯片的特点是可同时检测多种菌，可以减少实验次数，并且检测所需的引物较少。
2、聚合酶链式反应（poly merase chain reaction ，PCR）检测技术
PCR 的发展已经相当成熟，广泛应用于李斯特氏菌的检测。PCR 扩增特异性引物一种是依据李斯特氏菌的特异毒力基因序列而设计，一种是依据李斯特氏菌基因组中特异序列而设计。常用的靶序列为hly A 、iap 、inl 、Dth-18等毒力基因。利用PCR 方法来检测李斯特氏菌的优点是方法的特异性好，不足之处是灵敏度较低；将样品培养物经化学抽提后再进行扩增，提高了样品的检出率；并且可以检测到传统增菌方法不能检出的“活的非可培养”的李斯特氏菌。PCR 技术还可对李斯特氏菌进行定量检测。例如Nogva 等运用5′-核酸酶PCR 对单增李斯特氏菌定量；Choia 等运用cPCR 对李斯特氏菌进行定量；Long 等以hly 为靶基因，采用PCRELISA联合检测技术。
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