临床酶学标准化的新途径
在临床上，测定血清或其他组织中一些酶的水平对很多疾病的诊断、预防及判定病情的进展具有重要意义。酶的测定可利用生化学的方法测定酶的催化活性和将酶作为蛋白用免疫方法测定酶的质量。测定酶的催化活性是最为常用方法，它具有迅速、灵敏、成本低等特点。是目前临床上测定酶水平广泛使用的常规方法。但这种方法也存在着不足，作者拟就临床酶学测定中存在的问题及目前国际上解决问题的途径结合我们的一些调查结果做一阐述。
一、 测定酶催化活性存在的问题
测定酶的催化活性虽然是临床上最常用的方法，但由于酶的催化活性不仅决定于酶的含量，还受多种因素的影响，如所用底物的性质及浓度、反应介质的PH、温度、离子强度、激活或抑制因子等，因此具有方法依赖性。这是测定酶的催化活性存在的主要问题所在。因此对同一酶项目存在多种参考范围，各实验室间的结果缺乏可比性，室间质评用样本的靶值难以确定，甚至有时会引起临床上的误诊。国内各临床实验室间测定，酶活性结果的差异较大，明显高于一般项目的测定结果。
二、 解决酶活性测定方法依赖性的途径
对酶活性测定进行标准化是解决这一问题的最好方法。早在20余年前国际上就开始了这方面的工作。当时提出的标准化途径推荐使用统一的测定方法，一些学术团体推出了临床常用酶催化活性测定的推荐方法和参考方法。如国际临床化学联合会（IFCC）酶专家组已经完成了r-谷氨酰基转移酶（GGT）（1983年）、碱性磷酸酶（ALP）（1983年）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）（1986年）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）（1986年）、肌酸激酶（CK）（1991年）、乳酸脱氢酶（LD）（1994年）及a-淀粉酶（a-AMS）（1998年）等的推荐方法。经过多年的努力，成功地提高了酶测定的质量和可比性。但效果仍不能令人满意，还存在一些较严重的问题：第一，很多学术团体提出的推荐方法，即使原理相同，但试剂配方（缓冲液、底物、添加剂等）、反应温度等也可能不同，因此不同推荐方法间缺乏一致性；第二，推荐方法无法跟上分析方法和分析技术上的进步；第三，它不适应自动化分析仪器。
最近国际上提出了酶活性的测定标准化新途径，就是使用公认的酶校准物使不同的常规方法的测定结果得到统一。目前这项研究已取得了一定的进展。IFCC临床酶学校准物工作组（IFCCWG-CCE）于1997年8月和1998年3月分别在瑞士和西班牙召开了工作组会议，作者作为工作组成员出席了会议并参与了有关文件的制定，部分内容作为IFCC的文件将会很快发表。
三、 酶校准物的使用方法
使用酶校准物的方法就是用公认的酶校准物使一种或多种常规方法测定的结果与标准方法相同，也就是通过酶校准物将不同方法得出的结果的数值按标准物测定值所选定上午标准方法来表达。它是利用标准物作为载体，使测定结果的数值在标准方法和常规方法间传递。这样的话，使用标准的校准物，就有可能统一测定结果。
法国的Ferard教授（IFCC WG-CCE主席）几年前就组织了5个法国实验室对各实验室常规患者血清样本中的a-AMS、ALP、GGT等3种酶活性分别在校准前后进行了测定。每种酶有两个实验室参加研究，均使用相同的试剂盒在自动生化分析仪上进行测定。各实验室均使用统一的校准物即由欧洲标准局（BCR）提供的酶活性有证参考物（CRM318、CRM319、CRM371）进行校准。通过使用统一的酶校准物进行校准后，可使在不同温度下（30℃、37℃）、使用不同缓冲液（ALP测定）、不同底物（a-AMS、GGT测定）或不同底物浓度（GGT测定）的试剂盒测定结果相对集中。
卫生部临床检验中心与日立公司和宝灵曼公司合作，1997年在部分日立自动生化分析仪用户中进行了使用统一校准物进行校准前后测定质控血清结果的调查。被调查的实验室为部分日立7170、7150、7060、7250自动生化分析仪用户。要求被调查实验室在使用由宝灵曼公司统一发放的校准物（c.f.a.s）进行校准前后分别测定统一发放的两个浓度的质控血清。被调查的用户使用的试剂盒为各自常规使用的普通试剂盒，多数为国产品。试验结果表明校准后测定结果的分布明显较标准化准前集中，并较校准前更接近质控血清的靶值，表明使用统一的校准品可使使用不同试剂测定酶活性的结果相对统一，增加了不同实验室间结果的可比性。但有一些实验室经校准后其测定结果仍很不满意，这可能是这些实验室所采用的测定方法的特异性与校准物定值所用方法不同（此次调查对各实验室使用的测定方法没有做出规定），另外也不能完全排除质控血清基质效应的影响。
要想通过这一途径得到一致的酶活性测定结果，有2个条件必须满足：第一是测定方法原理一致以保证拟要进行标准的常规方法与参考方法的特异性尽可能相同。目前常用的证明的方法是用参考方法和常规方法同时测定患者样本（50例以上、较宽分布范围），观察两方法间的相关情况。第二个条件是酶校准物的可转换性（Commutability）。所用的酶校准物必须在标准方法与拟校准的常规方法中具有相同的特性。也就是说校准物的基质效应应很小。
四、 公认酶校准物的来源
有关公认的酶校准物的来源，目前已有几个国家和国际组织发表了测定酶催化活性的参考方法。BCR和美国国家标准技术研究院（NIST）已经研制出了某些酶的一级标准物（有证参考物，certified referense material，CRM或standard reference material，SRM），其特点是这些标准物质的值可溯源到表示该特性值单位的准确复现物上，每个经过验证的值都附有规定置信水平的不确定度。表4为BCR推出的部分人血清基质酶催化活性的有证参考物（CRM），这些标准物的值均是采用IFCC推荐方法确定的活性。目前IFCC推荐方法的反应温度均为30℃，与唱歌归方法中常用的37℃间存在如何转换的问题。但在1998年3月西班牙会议上，IFCC已经决定在近期内把所有IFCC测定酶活性的推荐方法的温度修改成37℃，将使这一困扰我们多年的问题得到解决。
表4 BCR推出的部分酶有证参考物（CRM）
名 称 代 码 来源类型
GGT CRM319 猪肾轻亚单位
ALP CRM371 猪肾肝-骨-肾
ALT CRM426 猪心脏胞浆同工酶
CK CRM299 人胎盘BB同工酶
LD CRM404 人红细胞LDI同工酶
ACP CRM410 人前列腺前列腺同工酶
a-AMS CRM476 人胰腺胰腺同工酶
CK CRM608 人心脏MB同工酶
*保存条件为-20℃
但这类标准物质价格昂贵，产量有限，无法用于常规。很有必要生产计量级别不同的，使用目的不同的校准物。为了保证它们的溯源性，必须按照一定的步骤进行准确度的传递。标准校准物由生产企业用CRM进行定值。酶校准物的大量生产和广泛应用，必定会极大地推进临床酶学测定标准化的进展，促进酶学测定水平的提高。
五、 使用酶校准物的优点
许多分析条件都会影响由酶催化反应速度，例如温度、底物的性质和浓度、PH、激活剂、抑制剂等。某些条件可随时间的改变而发生变化如试剂的变质等，都随时会影响反应速度。如果分析条件的变化可同等程度地影响校准物和未知样本，则可以使用酶校准物对结果进行补偿。使用酶校准物的另外一个优点是可校正温度设置不同造成的差异，校正分析仪控制误差以及仪器取样误差等所产生的难以观察到的系统误差。还可以预防波长和波宽变异造成的误差。
当实验证实病人标本和校准物具有相似的方法间行为时，酶校准物的使用可以允许我们按照标准方法测定的数值报告某些常规方法测定的患者样本中酶的催化活性。对具有同样分析特异性的方法，使用合适的酶校准物后，可以允许这些方法保持相近的参考范围和临床判断值。也就是说，使用经证实的酶校准物不仅能确保分析测量准确度的传递，而且在常规实战中还允许使用专门组织在临床酶学研究中获得的数据资料（如参考范围等）。总之，酶校准物的使用可改进方法间的符合程度，增加常规酶测定方法的可靠性。但酶校准物不能补偿精密度和特异性的分析系统。
