应用CTCBIOPSY®平台分离CTC探讨鼻咽癌患者循环肿瘤细胞...
应用CTCBIOPSY®平台分离CTC探讨鼻咽癌患者循环肿瘤细胞与EB病毒激活状态的关系
导语：
EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV）被证实与越来越多的恶性肿瘤相关而受到人们的关注，目前鼻咽癌循环肿瘤细胞（Circulating tumor cell，CTC）的研究及其临床意义并不明确，本文中研究人员使用CTCBIOPSY®平台分离CTC，并结合下游生物学技术探讨了鼻咽癌（Nasopharyngeal carcinoma，NPC）患者中CTC与EBV之间的关系。
背景介绍：
鼻咽癌是头颈癌中最常见的恶性肿瘤，CTC作为一个在多数肿瘤中极有潜力的预后指标，目前在鼻咽癌中的研究却非常少。EBV（Epstein-Barr
virus）由Epstein和Barr于1964年首次成功建株，又称人类疱疹病毒4型（Human herpesvirus
4，HHV-4)，是多种恶性肿瘤（如鼻咽癌）的病因之一，它主要感染人类口咽部的上皮细胞和B淋巴细胞，EBV的激活是鼻咽癌进展中的一个常见事件。本研究使用滤膜分离的方法富集鼻咽癌患者外周血中的CTC，并探讨了鼻咽癌患者中循环肿瘤细胞与EB病毒激活状态间的关系。
研究内容：
本研究入组了33名未分化型非角化性NPC患者，在患者进行初始治疗前采集5mL静脉血，并使用CTCBIOPSY®平台（芝友医疗）对血样进行分离染色，然后采用细胞形态学原理在光学显微镜下对CTC进行镜检计数，3个以上聚集成团的CTC称为CTM（Circulating
tumor
microemboli），随后将滤膜上已染色的细胞脱色后进行免疫组织化学染色（Immunohistochemistry，IHC)，IHC检测的标志物为CK5/6及P63。EBV
的DNA载量和VCA-IgA（病毒衣壳抗原）、EA-IgA（早期抗原）水平是EBV激活的重要指标。研究人员随后在滤膜上使用原位杂交方法检测了CTC中的EBERs（EBV-encoded
RNAs），EBER原位杂交是确定EBV与疾病关系的公认标准方法。在33例鼻咽癌患者中，22例（66.7%）检测出CTC（平均值为2.06）（图1）；2例（6.1%）（T3N3M0）检测出CTM，在所有TMN分期的NPC患者中均有CTC检出，CTC检出与TNM分期无显著相关性。CTC的检出和EBV的激活状态相关。在全部NPC患者和未发生远端转移的NPC患者中，CTC阳性患者的EBV的VCA-IgA水平高于CTC阴性患者（全部NPC患者阳性vs.阴性：4.86
vs. 3.88，P=0.016；未发生远端转移的NPC患者阳性vs.阴性：4.95 vs. 3.76，P=0.009
），CTC的检出数量与EBV的VCA-IgA水平和DNA载量相关。
图1 鼻咽癌患者中CTC检出图
图2 鼻咽癌患者中CTM检出图
图3 鼻咽癌CTC的IHC染色图
A) CK5/6染色 B) P63染色
图4 鼻咽癌CTM的EBERs原位杂交图
研究结论：
在不同TNM分期的NPC患者中，CTC和CTM均有较高的检出率，且CTC检出与EBV激活状态有关，CTC检出数量与患者的EBV激活状态呈正相关。使用CTCBIOPSY®平台，结合免疫组化、原位杂交等技术，可以对肿瘤患者外周血中的CTC进行更多的下游生物学研究分析。
本文系中山大学肿瘤防治中心课题组与芝友医疗合作的研究成果！
原始出处：
He
C, Huang X, Su X, Tang T, Zhang X, Ma J, et al. The association between
circulating tumor cells and Epstein-Barr virus activation in patients
with nasopharyngeal carcinoma. Cancer biology & therapy. 2017:0.
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项目成果
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科技前沿
