有机溶剂沉淀法浓缩蛋白质实验
实验方法原理
将有机溶液例如丙酮和乙醇加入蛋白质溶液时，和高浓度盐类似产生沉淀，这是因为它们能够降低蛋白质的溶解度。在温度为 10 ℃ 左右时蛋白质在有机溶剂中容易变性，所以在沉淀时必须特别注意冷却溶液和离心转头（0 ℃～4 ℃ 为佳），建议离子强度为 0.05～0.2 mol/L。
有机溶剂的浓度按体积百分数计算，累加体积并不精确。例如用简便的方法将 100 ml 水溶液要配制成 50％（v/v 乙醇溶液，就是向 100 ml 水溶液中加 100 ml 的乙醇溶液。尽管最后总体积是 192 ml。大多数蛋白质的分子量大于 15 kl），—般用 50％ 有机溶别迸行沉淀。
实验材料 蛋白质溶液
试剂、试剂盒 丙酮或乙醇再悬浮沉淀的缓冲液
仪器、耗材 烧杯磁力搅拌器和搅拌子离心机和转头
实验步骤
1. 在 4℃ 下，向 100 ml 蛋白质溶液中，缓缓加入 100 ml 丙酮， 或乙醇（冷却至 -20℃），在冰浴上持续温和地搅拌；
2. 在冰上持续揽拌 10～15 min；
3. 低温离心 10 000×g 10 min；
4. 除去上清液；
5. 用沉淀的 2 倍体积的冷缓冲液冉使沉淀悬浮。实际上变性蛋白质难于溶解，可用过滤或离心的方法除去。
注意事项
1. 酸性蛋白质在二价阳离子例如 Mg2＋ 存在下，以复合物的形式较易被沉淀。
2. 大分子的蛋白质及亲水的蛋白往往在较低浓度的有机溶剂中就能析出。
3. 在溶液 pH 值接近蛋白质的等电点时，蛋白质在有机溶液中的溶解度降低。
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